的应用肿瘤转移基因芯片筛选小鼠组织细胞肉瘤l-ⅱ转移相关基因

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1、南华大学硕士学位论文应用肿瘤转移基因芯片筛选小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ转移相关基因姓名：彭芳申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：朱建思20070501原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：年月日关于学位论文使用授权说明本人同意南华大学有关保留、

2、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：导师签名：日期：年月日2应用功能分类基因芯片筛选小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ转移相关基因研究生：彭芳导师：朱建思教授中文摘要目的：采用基因芯片技术比较筛选前的小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ与筛选后的具有高转移能力的第9代转移瘤细胞之间的基因表达谱，利用生物信息学方法筛选出与淋巴瘤侵袭和转移相关的差异基因。方法：L-Ⅱ瘤细胞接种小鼠胁部皮下，

3、取其肺转移灶制成细胞悬液接种另一小鼠体内，再取其肺转移灶继续传代。对筛选前的L-Ⅱ瘤株和筛选后的第9代瘤株的细胞形态、生存时间、肿瘤生长曲线、免疫组化的差异进行了比较。再分别提取筛选前后瘤细胞的mRNA，通过逆转录将细胞cDNA进行生物素标记，用美国Superarray公司的含113个目的基因的肿瘤转移基因芯片杂交,GEArray软件对结果进行分析，筛选出传代前后表达有差异的基因。对部分有差异表达的基因用RT-PCR和Westernblot进行分析鉴定。结果：用体内转移灶连续传代法筛选小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ至第9代。形态学观察:光镜

4、下筛选前后瘤细胞形态结构基本一致，细胞呈弥漫分布，细胞圆形至多边形，大小不等，核圆形、梭形或不规则形，嗜碱性增强，核浆比例增大，核分裂像较多，可见病理性核分裂像。生物学特性观察：小鼠荷瘤生存时间显示筛选前的L-Ⅱ瘤株为29.23±2.90天，筛选后的第9代瘤株为23.66±2.97天，P﹤0.05，两者差别有显著性。肿瘤生长曲线：结果显示筛选后的第9代瘤株生长速度快于筛选前的瘤株。免疫组化：筛选后的第9代瘤株IGF-1、MMP-10表达5均较筛选前的L-Ⅱ瘤株增强。用肿瘤转移基因芯片杂交筛选出传代前后L-Ⅱ瘤细胞的差异表达基因共21

5、个，涉及肿瘤转移发生发展的各个方面，其中上调基因17个,下调基因4个。其中：细胞黏附相关基因2个、基质金属蛋白酶2个、调节细胞周期基因3个、细胞生长与增殖基因5个、凋亡相关基因1个、转录调控基因2个、其他6个。选择其中有代表意义的4个基因利用RT-PCR和Westernblot进行验证，结果证实所选基因在筛选前后瘤细胞中均有差异表达，与基因芯片的表达情况一致，说明基因芯片结果可信度较高。结论：1成功筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株，筛选后的第9代瘤株具有更强的侵袭转移能力。2小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ的侵袭转移是一个涉及Kras-2、IGF-

6、1、MMP-10、MMP-13、Brms-1等重要转移基因和其他相关基因等多个基因共同参与的复杂过程。关键词：基因芯片；恶性淋巴瘤；转移；差异表达基因6Identificationofmetastasis-associatedgenesinmicehistiocytosarcomaL-ⅡusingcDNAmicroarrayoftumormetastasis-associatedgenesAbstractObjective:Toanalyzethedifferencesingeneexpressionbetweenmicehisti

7、ocytosarcomaL-Ⅱofparentandoffspringcelllinesusingmicroarraytechnologyandtoscreenlymphomametastasis-associatedgenesbybioinformaties.Methods:WesubcutaneouslyinjectedhistiocytosarcomaL–Ⅱcellsintherightflankofmice,thenisolatethecellsinpulmonarymetastasisandinjectedtheminan

8、othermousebythesamemethods.Weanalyzethetwokindsofstrainofdistinctmetastasisabilitybymorphlogyanalysis,meanlifespanwit