肿瘤转移相关基因cDNAmicroarrary制备的优化及应用

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1、山东省医学科学院硕士学位论文肿瘤转移相关基因cDNAmicroarrary制备的优化及应用姓名：闫实申请学位级别：硕士专业：微生物与生化药学指导教师：韩金祥20030501!!塑丝塑主塑薹竺兰堡垒兰壁堑壁垡塑叁董型!望丝垒型!翌!型z垄!!签丝垡丝墨堕旦中文摘要转移是恶性肿瘤的特征之一，是影响患者的预后和治疗的重要因素，因此深入研究肿瘤转移的病理生物学的分子机制，探讨转移细胞和宿主环境之间的相互作用关系，为临床有效地预防和良好的治疗提供有力的依据，具有重要意义。肿瘤发生转移包括许多复杂的因素，它们相互作用和相互依赖，使宿主体内

2、的平衡机制发生改变，促使肿瘤转移的发生。肿瘤的转移是一个复杂连续的过程，包括瘤细胞的脱落、浸润和迁移、粘附、局部生长等。研究表明在肿瘤的进展过程中，调控这些过程的基因的表达也在相应的变化着，影响其进展，使肿瘤向周围侵袭，逐渐发展到浸润状态，再到转移状态。一目前报道的与肿瘤转移调控有关的基因有很多种，通过调节细胞一细胞和细胞一基质间的作用，使细胞的能动性改变及细胞与其它细胞之间或与细胞外间质的粘附性异常，使瘤细胞易于脱离与周围细胞的附着而发生迁移，诱导局部血管形成等机制而促使肿瘤转移。在这些基因的共同作用下，促进肿瘤不同进程的发

3、生。然而，现在的研究方法的局限是大多数的检测手段仅能同时研究一个或几个基因，不能同时对多个基因进行检测。因此，不能全面的反映各个基因之间的关系。近几年来发展起来的基因芯片技术具有高通量的特点，可以同时检测大量基因，平行分析，打破了传统一次实验仅能对一个或者几个基因表达的差异进行检测的局限，可以同时监测同一组织或不同组织中的成千上万个基因的表达状况，寻找同～基因在不同组织中表达的差异和同一组织中不同基因间的关系，并且还具有快速、准确、敏感等特点，显示了在分析疾病相关基因方面具有的优越性。本研究对本实验室的肿瘤转移相关基因cDNA

4、micmarray制备过程中的不同环节的多项技术进行了优化，如载玻片的选择、‘玻片包备后的处理、点样后的处理、标记方法及标记过程的改进、芯片杂交体系的优化、沈片及扫描过程的改进等等，使其图象扫描信号清晰，背景信噪低，均匀，重复性良好，具!!!!丝堕主堡壅尘兰丝堡奎壁塑丛壁塑苤董固!!堕垒旦堡竺塑凹监监型塑丝些垦!!旦有普遍的推广价值。应用此芯片对肺癌细胞系、乳腺癌组织标本进行检测，发现肺癌两种细胞系之间差异表达基因79个，其中上调的基因34个，下调的基因45个：与乳腺癌转移相关的表达基因81个，其中上调的基因45个，下调的基因

5、36个。对部分基因进行点杂交检测，结果同芯片结果一致，进一步验证了该芯片的实用和可靠性。关键词肿瘤转移相关基因cDNAmicroarray优化肺癌乳腺癌细胞系表达谱分析ABSTRACTThemetastasisisoneofthemostimportantcharacterofmalignanttumoranditisthemaincausethatafI色ctthecureandprognosisefnciencyofcancerpatients．Itisimponantfort11eproVentionofmetastas

6、isande腩ctivetherapytomakeitclearoftheregulationmachanismoftumurmetastasisonthem01ecularleVelandworkouttllemetastasis．relatedfactorstofindouttllerelationsbetweencancercellsandthemicroenvio肌entofthehost．Therearemanyfactorsenvolvedintheprocessofmetastasis．Thepmcessismu

7、ltipleandcontinous，includingcancerceUleavingmeprimarysite，invasiona11dmigration，adhesionandbeinglocatedattllesecondrysite．Thecascadeofmetastasisiscommlledbymallyspecmcgenes．Theyareinteracted0rinterferedwitheachotherandinnuencethebi0109icalpropertiesoftumorcellswhich

8、eventuallymakethemetaStaSisofturnurhappen．Therearemanygenesthatwerereportedtobeinv01vedinthepmcessofmetastasis．TheycausethetuIllortoinvade