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时间:2019-02-16
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1、硕士学位论文Sox10在肿瘤增殖和转移中的论文题目作用及机制研究生姓名衡磊指导教师姓名张学光郭亚军专业名称免疫学研究方向肿瘤免疫论文提交日期2012年5月ISox10在肿瘤增殖转移中的作用及机制中文摘要Sox10在肿瘤增殖和转移中的作用及机制中文摘要目的:Sox10是Sox家族的重要成员,我们前期研究结果发现其在多种肿瘤细胞系中存在高甲基化状态伴随mRNA表达水平下降,提示Sox10是潜在的抑癌基因,但其表达下调在肿瘤中的生物学功能及具体的分子机制尚不清楚。方法:建立高效表达Sox10的慢病毒系统,感染Sox10表达缺失的KYSE150、HCT116和HCC-
2、LM3细胞,Realtime-PCR和WesternBlot法检测Sox10基因在肿瘤细胞系中的表达。通过MTS,克隆形成实验,软琼脂形成及裸鼠皮下成瘤实验检测上调Sox10对细胞增殖的影响;通过TUNEL实验检测Sox10对细胞凋亡的影响;通过划痕实验、Transwell实验和裸鼠皮下-肺转移模型检测Sox10对肿瘤细胞转移的影响;并通过免疫共沉淀和荧光素酶报告基因技术检测Sox10基因对WNT/β-catenin信号通路的调控作用。结果:成功构建高效表达Sox10的慢病毒系统,Realtime-PCR和WesternBlot法证实Sox10基因在KYSE1
3、50、HCT116和HCC-LM3细胞中高效表达。共聚焦荧光显微镜显示Sox10定位于细胞核。体内外实验表明,与对照组相比,上调Sox10表达能显著抑制肿瘤细胞的克隆形成能力,体内成瘤能力并促进肿瘤细胞的凋亡。上调Sox10的表达水平后能显著抑制肿瘤细胞的迁移,侵袭能力及肺转移灶的形成,表明Sox10是重要的抑癌基因。免疫共沉淀证实Sox10可与β-catenin相互结合,荧光素酶报告基因显示Sox10可抑制β-catenin的转录活性。结论:Sox10可显著抑制肿瘤细胞的增殖和转移能力,是重要的抑癌基因。Sox10可通过调节WNT/β-catenin信号通路
4、发挥抑癌基因的功能。关键词:Sox10;细胞增殖;细胞转移;β-catenin作者:衡磊指导教师:张学光教授郭亚军教授IITheFunctionandMechanismofSox10intumorigenesisandMetastasisAbstractTheFunctionandMechanismofSox10intumorigenesisandMetastasisAbstractObjective:SRY-boxcontaininggene10(Sox10)isamemberofthehighmobilitygroup(HMG)transcriptionf
5、actorsuperfamily.WehavepreviouslyprovedthattheexpressionofSox10wasdiminishedincancercellsduetopromotermethylation.TheaimofthisstudywastoexploretheeffectsandmolecularmechanismofSox10onthedevelopmentofcancer.Methods:ThegeneencodingSox10wasamplifiedandinsertedintopLVX-AcGFP-N1vector.We
6、employedlentivirustoelevatetheexpressionofSox10inhepatocellularcarcinomaHCC-LM3,esophagealcarcinomaKYSE150andcolorectalcarcinomaHCT116celllines,allofwhichhavefullymethylatedandcompletelysilencedSox10.ExpressionofSox10wasdeterminedbyquantitativereverse-transcriptionpolymerasechainrea
7、ctionandwesternblot.ThelocalizationofSox10incancercellswasinvestigatedbyconfocallaserscanningmicroscopy.Cellgrowthwasmeasuredby3-(4,5-dimethyl-thiazol-2yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium(MTS)assay,colonyformationandanchorage-independentgrowthassay.Cellmi
8、grationwasquantifie
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