缺氧对体外培养大鼠o2a tau蛋白的影响

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1、福建医科大学硕士学位论文缺氧对体外培养大鼠O2ATau蛋白的影响姓名：冯俊生申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：王玮20090301缺氧对体外培养大鼠02ATau蛋白的影响中文摘要目的：培养、纯化以获得较高纯度的大鼠少突胶质f；i『体细胞(02A)，观察各个时期细胞的形态学变化；在模拟缺氧条件下培养不同的时间，观察02A在缺氧条件下的形态学变化，采用免疫组化和Westernblot等技术，测定各个缺氧时间段Tau蛋白的强度，探索缺氧对02ATau蛋白的影响。方法：采用两次恒温摇床振荡培养法培养、纯化02A，A285免疫荧光染色法进行细胞鉴定，倒置荧光显微镜拍

2、照，并观察计算细胞纯度。以低糖缺氧环境模拟体内缺氧缺血状态，建立大鼠02A体外缺氧模型，观察02A在各个时间点的形态学变化，并开展Westernblot和免疫组化实验，利用激光共聚焦显微镜测定荧光强度，反映Tau蛋白量的变化。结果：纯化后02A细胞胞体呈圆形，有单极或双极突起，形成克隆球，A285标记阳性，免疫荧光鉴定细胞纯度可达85％以上。随着暴露在低糖缺氧环境中时间的延长，02A细胞数量逐渐减少，突起逐渐缩短，免疫荧光强度和灰度值均逐渐减弱，Tau蛋白量呈减少趋势。结论：1．通过体外进行纯化、培养，可以获得较高纯度的02A细胞；2．随着低糖缺氧时间的延长，02A

3、形态发生变化；到缺氧12小时，大部分的02A死亡，形成细胞碎片。3．随着低糖缺氧时间的延长，02A的荧光强度逐渐减弱，Tau蛋白的量逐渐减少。．关键词：02A缺氧缺血Tau蛋白体外模型4ttypoxiaon01igodendrocyteProgenitorscel1S’(02A)TauProteinfromNeonatalRatCerebruminvitroAbstractObjectiveToobtainhighpurityofoligodendrocyteprogenitorcel1S(02A)，whichgetfromNewbornratscerebrumby

4、cultureandpurification，andtoobservethemorph0109icalchangesduringthecourse．Thenputthe02ACellsundertheconditionsofhypoxiaischemiafordifferenttime，tostudythemorph0109icalchangeSunderthiSconditions．Atthesametimeimmunofluorescenceandwesternblotaredonetoexplorehypoxiaischemiaon02ATauproteini

5、nviVO．Methods02AwereiS01atedbyconstanttemperatureorbitalshakingtwiceandidentifiedbyimmunofluorescencetechniquewithA285protein，thentakenphotOSwithinvertedfluoreScencemieroscopecamera，andwegotitSpurity．Thenwecreated10W—sugarhypoxiaenvironmentartifiCial1Y，whichaccordingwiththeconditionsof

6、ischemiaandhypoxiainviVO，SOwesetthemodelofischemiaandhypoxiainvitrofor02A，thenmayfinditSmorphologicalchangesatthevariOUStimepointS，andwegotfluorescenceintensityofitwithlaserscanningmicroscopeandusedwesternblottogainitsgrayvalue，whichreflectstheamountofTauproteinandshowitstendency．Resul

7、ts02A’SbodyiSround，withunipolarorbipolarprocesses，andthecellSmaygettogethertoformC10ningballS．ItshowspositiveidentificationwhentaggedbyA285，andthepurityiSover85percentbyimmunefluorescence．Withtheextensionoftimeforischemiaandhypoxia，thequalityof02Acellsgraduallyreduce，andtheprocessesg