缺氧对大鼠器官型海马脑片tau蛋白的影响_硕士学位论文

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1、福建医科大学硕士学位论文缺氧对大鼠器官型海马脑片tau蛋白的影响姓名：于天莲申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：赵小贞20090601缺氧对大鼠器官型海马脑片tau蛋白的影响中文摘要目的1．建立4周龄大鼠海马脑片培养模型。2．观察缺氧对4周龄大鼠海马脑片tau蛋白的影响，以期建立拟痴呆组织模型。方法1．体外微孔膜插件培养海马脑片，应用倒置相差显微镜、LDH检测试剂盒、免疫荧光组织化学法及共聚焦激光扫描显微镜观察培养情况。2．标准条件培养7天后，入缺氧培养箱分别缺氧30min，lh，1．5h，

2、2h，然后恢复标准条件培养6天，应用倒置相差显微镜观察培养情况，用免疫荧光组织化学法及共聚焦激光扫描显微镜对tau蛋白表达水平进行观察和统计分析。结果1．培养海马脑片逐渐变薄，细胞条带亮度逐渐减弱；培养12d内，培养液中LDH含量稳定，海马脑片存活良好；在培养过程中，神经细胞逐渐减少，星形胶质细胞逐渐增多。2．p-Tau(Ser214)蛋白与总蛋白Tau．5的荧光强度比值显示缺氧lh组在培养第13天(即缺氧第6天)比对照组明显增大(尸<0．05)，Tau(Ab．214)蛋白与总蛋白Tau．5的荧光强

3、度比值显示缺氧组在培养第13天与对照组无显著差异(尸>0．05)。3．p-Tau(Ser396)蛋白，缺氧30min组的表达量稳定增加，缺氧1h组的表达量在培养第10天(即缺氧第3天)比对照组明显增多(P<0．05)，在培养第13天表达量显著减少(尸

4、组明显增多(P<0．05)，在培养第13天缺氧30min组的表达量明显增多(尸

5、Thr231、Thr205、Thrl81位点在此缺氧模型中可能有过度磷酸化。4．缺氧30min和lh的器官型海马脑片有望成为拟痴呆组织模型。关键词海马Tau蛋白缺氧器官型培养脑片2TheEffectofHypoxiaonTauProteinofOrganotypicHippocampalSliceinRatAbstractObjective1．Toestablishamodelfororganotypichippocampalslicecultureof4week．oldrats．2．Toobser

6、vetheeffectofhypoxiaontauproteinoforganotypichippocampalslicein4week—oldratsforbuildingupasimulatingdementiatissuemodel．Methods1．Hippocampalslicesfrom4week-oldratswereincubatedwithinsertofmicroporousmembrane．Invertedphasecontrastmicroscope，lactatedehyd

7、rogenase(LDH)kit，immunofluorescencehistochemicalmethodandconfocallaserscanningmicroscopewereusedtoobservethecircumstanceoftheculture．2．Thehippocampalsliceswereculturedforsevendaysinnormalcondition．Thentheywereculturedforhalfanhour，anhour，oneandhalfallh

8、our，andtwohoursintheconditionofhypoxia．Tofollow，theywereculturedforsixdaysinnormalconditionagain．InvertedphasecontrastmicroscopeWasusedtoobservethecircumstanceoftheculture．TheexpressionleveloftauproteinWasobservedandmadesomestatisticala