秀丽线虫反转座基因ssp-31的表达和功能分析

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1、分类号——UDC——密级——编号——牟中研鬣夫等硕士学位论文学位申请人姓名：垫斐：申请学位学生类别：全里劐塑±申请学位学科专业：堑堑望指导教师姓名：墨旦菱邋⑧M—ASTER雠'STH丈E铘幽㈣㈣㈣lY25559岑葺硕士学位论文秀丽线虫反转座基因ssp-31的表达和功能分析论文作者：赵斐指导教师：王国秀教授学科专业：动物学研究方向：动物生化与分子生物学华中师范大学生命科学学院2014年5月⑧硕士学位论文MASTER’STHESISExpressionandFunctionalAnalysistotheretrocopygenessp-31ofA

2、ThesisnnSSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheM．s．DegreeinBiologyByZhaoFeiPostgraduateProgramCollegeofLifeScienceCentralChinaNormalUniversitySupervisor：WangGuoxiuAcademicTitle：ProfessorSignatureMay,2014⑨硕士学位论文MASTERlSTHESIS华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交

3、的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。作者签名：叠受日期：训铲年5月Z卵学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可

4、以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密，在——年解密后适用本授权书。非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。作者签名：壑鼗日期：弘I千年歹月谚E1导师签名：日期：w怦年歹月诸日本人已经认真阅读“CALLS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“CALLS高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中的规定享受相关权益。作者签名：赵日期：bI中年y月⑧硕士学位论文MASTER’STHESIS捅要基因重复(genedupl

5、ication)是新基因形成的重要机制，在遗传进化和生物演化中发挥着重要的作用，其中由RNA介导的基因重复形成的反转座基因(retrocopy)通常被认为是无功能的，但近来的相关研究在果蝇、斑马鱼及一些哺乳动物和植物等的基因组中都已筛选出大量有功能的反转座基因，并且其中一些基因的功能已经通过实验得到证实。秀丽线虫(Caenor砌是多细胞动物中第一个被．bditiselegans)测定全基因组序列的生物，现已成为发育生物学、神经生物学、细胞凋亡、疾病与衰老等研究领域的模式生物，也是研究比较基因组学及系统演化的理想实验材料，但其反转座基因的研究尚

6、处于起步阶段。2012年Zou等对秀丽线虫基因组中的反转座基因进行筛选共发现43个反转座基因(如ssp-31)，根据公共表达数据库以及RT．PCR实验的结果推测其中大部分反转座基因都可以表达，且可能具有一定的功能，但尚未通过实验对其在线虫不同发育期的表达量差异及生物学功能进行分析和验证。本实验根据反转座基因可表达、dN／dS小于0．5、P值小于0．0l的标准以及本实验室的研究方向(线虫的生殖发育)，最终选择了秀丽线虫反转座基因ssp-31进行研究，该基因隶属于精子特异性蛋白(SSP)家族，该家族共有12个成员。根据wormbase网站公布的对

7、SSP家族成员的RNA干扰实验结果和脂肪代谢与线虫生殖发育关联性的研究，推测反转座基因ssp一31可能在线虫的脂肪代谢、生长发育以及生殖能力等方面具有一定功能性，但目前对于反转座基因ssp一31功能的相关研究尚属空白。本文是首次对秀丽线虫反转座基因ssp一31的表达和功能进行初步研究。首先利用RT—PCR技术扩增出ssp一31基因331bp的片段，以确定该基因可以表达，并利用荧光定量PCR技术对该基因在秀丽线虫生长发育不同时期(卵、L3、L4及成虫)的表达量进行了分析。结果表明ssp-31基因在卵及成虫期的表达量较高，在L3和L4期的表达量则

8、较低，且存在显著性差异(p<0．05)，故推测该基因属于母源性基因，可能在线虫的产卵行为等方面起作用。进一‘步采用RNA干扰技术，对ssp一31基因的生物学功能进行