秀丽线虫中脂肪代谢基因的筛选验证及调控通路的初步研究

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1、分类号学号M201171582学校代码10487密级硕士学位论文秀丽线虫中脂肪代谢基因的筛选验证及调控通路的初步研究学位申请人：许会艳学科专业：生物化学与分子生物学指导教师：吴政星教授答辩日期：2014年1月17日万方数据ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceScreeningandEvaluationofGenesInvolvedinLipidMetabolismandPreliminaryStudyontheRegulatoryP

2、athwayinC.elegansCandidate:XuHuiyanMajor:BiochemicalandMolecularBiologySupervisor:Prof.Zheng-XingWuHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan430074,P.R.ChinaJanuary,2014万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文

3、中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日万方数据华中科技大学硕士学位论文*摘要脂肪代谢是维持机体

4、正常生命活动和生理功能的基本物质与能量代谢的过程，是生命有机体三大基本代谢活动之一。动物体内的储存脂肪主要是中性脂肪，储存在白色脂肪细胞内，存储量取决于合成代谢与分解代谢间的动态平衡。在隐杆秀丽线虫中，脂肪主要以脂滴的形式存在，脂滴可以通过生化染色定量分析，也可以标记脂滴通过成像的手段定性、定量的分析。本文中，我们在突变线虫中利用苏丹黑B染色筛选，发现了脂肪含量明显增加的突变体，破碎虫体测定突变体中性脂肪的相对含量也升高，可以初步确定基因T07D10.2参与了脂肪代谢的过程。当外源过表达基因T07D10.2时，发现脂肪含量增加的表型得到恢复。生化染色不能对脂滴进行清晰的

5、观察和数目统计，因此，我们首先把表达脂锚定融合绿色荧光蛋白的质粒整合到野生型线虫中，得到整合虫系ZXW618，并用LysoTrackerRed和NileRed染色，证明该表达蛋白能够实现对脂滴的标记。然后把筛选到的突变体与整合虫系杂交，得到脂滴被标记的稳定突变体虫系ZXW619，这为以后共聚焦成像奠定了基础。成像后通过定量统计分析，我们发现这种突变体的脂滴数目明显增多，而脂滴的大小没有变化。我们对基因T07D10.2在头部的表达谱做了分析，目前已确定它在ASI中表达。我们已经确定基因T07D10.2参与了脂肪代谢的调控，正试图找到神经调控通路。关键词：苏丹黑基因筛选显微

6、注射脂滴标记激光共聚焦显微镜成像定量分析*本研究课题得到国家重点基础研究发展计划(2011CB910200)资助。I万方数据华中科技大学硕士学位论文AbstractAsoneofthethreebasicmetabolisms,lipidmetabolismisindispensabletomaintainnormallifeactivitiesandphysiologicalfunctionsinthebasicprocessofsubstanceandenergymetabolism.Neutralfatisthemajorcomponentofdepotfat,

7、whichisstoredinadiposecellsinanimals,andtheamountsofneutralfatdependsonthebalanceofanabolicmetabolismandcatabolism.InCaenorhabditiselegans,fatismainlystoredinlipiddroplets.Theamountoflipiddropletscanbequantifiedbyanalysisofbiochemicalstainingorgeneticlabeling.Inthispaper,