超氧化物歧化酶在hcy诱导thp―1单核细胞源性巨噬细胞中抗氧化作用

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1、超氧化物歧化酶在Hey诱导THP-1单核细胞源性巨噬细胞中抗氧化作用摘要：目的探讨超氧化物歧化酶（SOD）在Hey诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞氧化应激中的作用。方法THP-1单核细胞，加入佛波酯（PMA）诱导分化为巨噬细胞，然后加入100nmol•L-1的Hey和100卩mol•LTHcy+叶酸+VB12,并设置对照组（OuMHey）,孵育48h后收集细胞。采用Fe3+还原比色法检测总抗氧化能力（T-AOC）、黄嚓吟氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性及硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结

2、果lOOumol•L-lHey组与对照组比较，T-AOC、SOD水平明显降低，MDA的含量明显升高；与loopmol・LTHcy+叶酸+VB12组比较，T-AOC、SOD水平升高，MDA的含量降低。结论Hey可诱发THP-1单核源性巨噬细胞发生氧化应激，SOD的活性下降且与MDA呈负相关，表明SOD在Hey诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞中的抗氧化作用下降。关键词：超氧化物歧化酶；同型半胱氨酸；THP-1单核细胞源性巨噬细胞；氧化应激；动脉粥样硬化动脉粥样硬化（AS）是一种多因素诱导的慢性炎症性疾

3、病，在其众多的致病因素中，氧化所致的损伤与AS的发生发展密切相关。同型半胱氨酸（Hey）已被大量临床及循证医学证实是AS的一个重要的独立危险因子，Hey致AS的确切机制仍然有待阐明，目前多数学者认为与Hey致氧化应激毒性损伤有关。正常情况下，随着氧化代谢效率的提高，体内的抗氧化能力也不断增强，人体已经形成较为完善的抗氧化体系，即机体和细胞内活性氧的生成和清除处于一种动态平衡，当在某些因素的作用下这种平衡被打破，就形成了氧化应激。在机体抗氧化机制的研究中，超氧化物歧化酶（SOD）作用的发现具有重要意义。

4、SOD催化超氧阴离子自由基的歧化反应，作为氧自由基清除的第一反应过程，在阻止自由基和脂质过氧化对机体的损害方面起关键性作用。因此，本研究通过体外培养THP-1单核细胞源性巨噬细胞，探讨SOD在Hey诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞氧化损伤中的作用。1资料与方法1.1-般资料THP-1单核细胞株来源于四川大学华西医学院；RPMI-1640培养基为GIBCO公司产品；小牛血清，胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料研究所；同型半胱氨酸（Hey）、叶酸、维生素E12、佛波酯（PMA）为Sigma公司产品；总

5、抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；BCA蛋白含量检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。1.2方法1.2.1单核细胞培养将复苏好的THP-1单核细胞接种于15%胎牛血清的RPMI1640培养液中，于37°C、5%CO2的培养箱中静置培养，传代。以4X106密度接种于25cmX25cm培养瓶，加入PMA使其终浓度为500umol-L-1（含7%胎牛血清）孵育48h,显微镜下观察细胞呈贴壁状态，证实THP-1细胞已诱导分化为巨噬细

6、胞。1.2.2实验分组当贴壁的THP-1巨噬细胞密度达到lX106/mL时分别加入100nmol•L-1的Hey和100Pmol-L-1Hey+叶酸+VB12,并设置对照组（OuMHey）,孵育48h后检测氧化应激指标。1.2.3培养细胞的收集、破碎及蛋白浓度的测定用橡皮刮子刮下孵育后的THP-1巨噬细胞，1000rpm/min,离心10min弃上清，lmlPBS轻轻吹打，再次1000rpm/min,离心lOmin弃上清，重悬于0.5ml缓冲液中。功率300W,冰水浴，每3〜5s超声一次，间隔4次。上

7、述样本用凯基BCA蛋白含量检测试剂盒测定蛋白浓度,用于计算。1.2.4氧化应激指标测定总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）等指标均采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒进行测定。1.2.5统计学处理用Prism5.0统计软件进行统计学分析，结果以x±s表示，组间两两比较用Student-Newman-Keuls检验，两样本均数间比较采用Student?st检验，多样本均数间比较采用0ne~wayANOVA检验，p