铝致大鼠淋巴细胞凋亡的线粒体2fcaspase依赖性途径机制

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3、三氯化铝(AICl3"6H20)。采用AO／EB双荧光染色法观察淋巴细胞的凋亡形态；流式细胞术检测细胞凋亡指数：琼脂糖凝胶电泳法检测DNAladder；JC．1荧光探针法检测线粒体膜电位(Arm)：Westernblot检测胞浆内细胞色素C(CytC)蛋白表达量；分光光度法检测Caspase3和Caspase9的活性：实时荧光定量PCR法检测Bcl．2、Bax、Caspase3和Caspase9基因mRNA表达水平。旨在探讨铝致大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的线粒体／Caspase依赖性途径，结果表明：1荧光

4、显微镜下可见，GC脾脏淋巴细胞呈绿色的圆形或椭圆形，染铝组均有绿色固缩状早期凋亡细胞、橘红色固缩状晚期凋亡细胞和橘红色圆形或椭圆形坏死细胞。染铝组脾脏淋巴细胞早期凋亡指数与晚期凋亡指数均显著升高，说明铝可诱导大鼠脾脏淋巴细胞凋亡。2DNAladder分析表明，GC脾脏淋巴细胞无梯形条带出现，染铝组脾脏淋巴细胞均出现典型的DNA梯形带，说明铝可致大鼠脾脏淋巴细胞DNA损伤。3染铝组脾脏淋巴细胞红绿荧光比例显著低于GC，表明铝可引起大鼠脾脏淋巴细胞△、I，m下降，导致脾脏淋巴细胞线粒体损伤。4染铝组脾脏

5、淋巴细胞胞浆中CytC蛋白表达量明显增加，说明铝可诱导淋巴细胞线粒体内CytC释放，而产生细胞毒性作用。5染铝组脾脏淋巴细胞内Caspase3、Caspase9活性及mRNA表达量均显著高于GC，说明铝可引发脾脏淋巴细胞Caspase级联反应产生细胞毒性。6染铝组脾脏淋巴细胞Bcl．2、BaxmRNA表达量均升高，Bcl．2／Bax值随染铝浓度增大而升高，表明铝可通过诱导凋亡基因表达调控淋巴细胞凋亡。上述结果说明，铝可通过线粒体／Caspase依赖性途径导致大鼠脾脏淋巴细胞凋亡。本研究结果可丰富铝免

6、疫毒理学资料，为铝免疫毒性的预防奠定理论基础。关键词铝：大鼠；脾脏淋巴细胞：细胞凋亡：线粒体／Caspase依赖性途径ABSTRACTTheMitochondria／CaspaseDependentPathwayMechanismofApoptosisinCulturedRatsSpleenLymphocyteInducedbyAluminumAbstractSpleenlymphocyteswereculturedinvitrotoinvestigatethemitochondria／caspas

7、e-dependentpathwayapoptosisinducedbyaluminuminrats．ThespleenlymphocyteswereisolatedfromWistarratsandculturedinRPMI-1640medium．ThelymphocyteswereexposedtoAlCly6H20infinalconcentrationof0(controlgroup，GC)，0．30(10w—dosegroup，GL)，O．61(middle—dosegroup，GM)，

8、and1．21(high—dosegroup，GH)mmol’L．1，respectively．Lymphocytesmorphology,apoptosisindex，DNAladder,mitochondrialtransmembraneprotential(Avm)，CytCexpressionofcytoplasmandtheactivityofCaspase一3，9weredetectedusingAcridineOrange／EthidiumBromide