mc-lr诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡的线粒体-caspase依赖性途径研究

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1、学校代码１０４５９学号或申请号２０１２１２２７２８７１密＇级碑４（１尖ｆ硕±学位论文ＭＣ－Ｌ民诱导大鼠睾丸支持细胞调古的线粒体－ｃａｓａｓｅ依赖性途径研究ｐ作者姓若：薛利剑导师姓名：张慧珍教授学科口类：医学专业矣妳：劳动卫生与环境卫生学培养院系：公共卫生学院完成时间：２０１５年４月ＡｔｈｅｓｉｓｓｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｆｏｒｔｈｅｄｅｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｇＭ－Ｌ民虹ｄｕｃｅｄｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎＳｅｒｔｏｌｉＣｅｌｌｓＡ

2、ｏｐ１；ｏｓｉｓｖｉａｔｈｅｐＭ－ｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＣａｓｐａｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔＰａｔｈｗａｙＢｙ：ＬｉｌｉａｎＸｕｅＳｕｐｅｒｖｉｓｏｎＰｒｏｆ．ＨｕｉｚｈｅｎＺｈａｎｇＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｃｃｕａｔｉｏｎａｌａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈｐｐＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＡｒｉｌ２０１５ｐ，原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进斤研究。所取得的成果除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集

3、体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均Ｗ在文中Ｗ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。．学位论文作者签名：日期；日利２＾／产的脅列学位论文使用授权声明。本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学、可Ｗ将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影巧缩印或者其他复制手段保留论文和汇编本学位论文。本人离校后

4、发表、使用学位论文一或与该学位论文直接相关的学术或成果时。保密论，第署名单位仍为郑州大学文在解密后应遵守此规定。学位论文作者签名：如日瓶房日作１叫Ｉ啤ｍ病要目的通过检测细胞调亡率、民ＯＳ含量和线粒体膜电位变化ｗ及相关调亡蛋白相对表达水平－ＬＲ是ｃａｓａｓｅ依赖性途径诱导睾丸，探讨ＭＣ否通过线粒体介导的ｐ－支持细胞调亡，为保护、预防和治疗ＭＣＬＲ所致的生殖系统损伤提供科学依据。方法１８－２０ＳＤ１．原代细胞培养：从青春前期日龄天）大鼠睾丸中提取、分离、（纯化睾丸支持细胞，建立原代培养睾丸支持细胞

5、模型。－－２ＣＣ－ＣＣＫ８ＬＲ（０１５１０２０４０．Ｋ８实验：试剂盒检测不同浓度ＭＣ，，，，，，４ｈＣＣ４ＩＣ２、如帖／ｍｌ）作用睾丸支持细胞２后细胞増殖变化，确定Ｉｓｏ，设置Ｉｓｏ／、ＷＩＣｓｏ为后续实验浓度。３－．实验分组ＬＲ：睾丸支持细胞分为对照组（培养液）、ＩＣＷ４、ＩＣ５０／２、ＩＣ５０ＭＣＣａｓａｓｅｚＶＡＤｆｉｎｋ０ｎｏＭＣ－抑制剂（５ｉＩ／Ｌ）＋ＩＣＬＲ组Ｃ组和ｐｐ５０Ｗ及抗氧化剂ＮＡＣＭＣ－ＬＲ２４ｈ（ｌＯｍｍｏｌ／Ｌ）＋Ｉ５０组，继续培养。４－．调亡率检测：Ａｉｍｅｘｉ

6、ｎＶＦ打Ｃ／ＰＩ双染联合流式细胞仪检测各处理组细胞调亡率变化。５ＲＯＳ．活性氧检测试剂盒联合巧光显微镜和流式细胞仪检测不同浓度：ＭＣ－ＬＲ和ＮＡＣ预处理组细胞内ＲＯＳ英光值变化。－ＭＣ－６．线粒体膜电位１：ＪＣ试剂盒联合流式细胞仪检测不同浓度ＬＲ和■、ＮＡＣ预处理組细胞线粒体膜电位变化。７．蛋白检测：利用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测各处理组细胞内细胞色素Ｃ、－－－－３量变化Ｇａｓｐａｓｅ９、ＣｌｅａｖｅｄＣａｓｐａｓｅ９Ｗ及Ｃａｓｐａｓｅ蛋白相对表达。结果１ＭＣ－．ＬＲ（０１５１０２０４０６０／ｍｌ）作

7、用睾丸支持细胞２仙后，不同浓度，，，，，，腿ＭＣ－ＬＲ户＜０５）细胞增殖被明显抑制．０。，且随着浓度升高，増殖抑制率显著升高（－ＬＲ作用睾丸支持细胞２４ｈ３２经计算ＭＣＩＣ５０为帖／ｍｌ，后续实验浓度分别为：８ｉ／ｔｎｌ１６＾／ｍｌ３２ｉ／ｉｎｌ。ｇ，ｎ和｜ｇ（ｇ－ｍ２ＭＣＬＲｌ１６３２．能诱导睾丸支持细胞调亡８／／ｍｌ和帖／ｍｌ，染毒组细帖，ｎｇ〇ｔ０胞调亡率分别为３．９００／〇±０．２００％、６．０００％±０．１００％、２７．２６６％．１１５％，随着Ｉ＜０？－ＬＲ浓度升高５ＭＣ，细胞

8、调亡率显著升高（Ｐ．０）。３ＭＣ－ＬＲＲＯＳ．能增加睾丸支持细胞内含量。巧光显微镜和流式结果均显－示：随着ＭＣＬＲ