铀矿尘致raw264.7细胞凋亡的线粒体相关途径的研究

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4、其时效关系；Hoechst33258荧光标记法及Annexin-VFITC/PI双染法分析铀矿尘对RAW264.7细胞凋亡形态学和凋亡率的影响；罗丹明123荧光探针检测铀矿尘作用于RAW264.7细胞后，线粒体膜电位的改变；WesternBlot检测铀矿尘作用后的RAW264.7细胞中各凋亡相关蛋白的表达情况：细胞内细胞色素C（Cyt-c）以及线粒体和胞浆内Cyt-c，剪切的半胱天冬酶-3（Cleaved-Caspase--3），剪切的半胱天冬酶-9（Cleaved-Caspase-9）、剪切的聚腺苷二磷

5、酸核糖聚合酶（Cleaved-PARP）、Bcl-2以及Bax。Q-PCR法检测铀矿尘对RAW264.7细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响；结果：MTT结果显示不同浓度铀矿尘作用于RAW264.7细胞不同时间后，细胞存活率呈染毒时间和剂量依赖性下降。将不同浓度铀矿尘作用于RAW264.7细胞24h后，Hoechst33258染色和Annexin-VFITC/PI双染法流式细胞仪检测，两者结果均显示RAW264.7细胞凋亡随着铀矿尘浓度的增加而增加。Rh123染色后，荧光分光光度法检测，提示线粒体膜电位随

6、着铀矿尘浓度增加而降低。细胞内Cyt-c和胞浆内Cyt-c表达成上升趋势，而线粒体内Cyt-c的表达是降低的；Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9及Cleaved-PARP蛋白的表达I均升高，提示这三种蛋白的前体均被激活。Q-PCR结果显示，随着铀矿尘浓度增加，Bcl-2基因表达降低而Bax基因表达增高；WesternBlot结果显示：Bcl-2蛋白表达降低，Bax蛋白表达增加，与其基因的表达趋势相同。结论:1.25～400μg/ml铀矿尘可以诱导小鼠巨噬细胞RAW264

7、.7细胞发生凋亡；2.铀矿尘致RAW264.7细胞的凋亡作用可能是通过依赖Caspase-3的线粒体途径实现的；3.Bcl-2蛋白家族中Bcl-2和Bax可能参与调节铀矿尘致RAW264.7细胞的凋亡。关键词：铀矿尘；巨噬细胞；凋亡；线粒体途径IIMITOCHONRIALRELATEDPATHWAYINVOLVEDINAPOPTOSISINRAW264.7CELLSINDUCEDBYURANIUMDUSTDuoLi(Publichealthandpreventivemedcine)DirectedbyXi

8、ngPengHeProfessorAbstract：Objective:Toexplorethemechanismofmitochondrial-relatedpathwayofapoptosisinducedbyuraniumdust(UD)inRAW264.7cell,toclarifythemechanismofuraniumdustinducedlunglesion.Methods:Theexperimentwasdi