免疫胶体金技术快速检测大肠杆菌o157和志贺毒素

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1、上海交大硕士论文ABSTRCTofpositivedetectionrateinonebatchwas2.1%,theaverageCVofpositivedetectionrateindifferentbatchwas6.9%.Thesame58isolateswereassayedinGICAforStx2.ThecoincidenceofGICAwithverocytotoxicityassayswas50%,thereactiontimewas5～10min,theaverageCVofpositivedetectionrateinoneba

2、tchwas2.6%,theaverageCVofpositivedetectionrateindifferentbatchwas28.85%.GICAforE.coliO157inrepeatabilityandspecificityisbettertobeapotentialcommercialkit.However,moreworksshouldbedonetooptimizetheantibodytiterandsensitivityaspectsofGICAforStx2toadvancepositivedetectionrateandre

3、peatability.KEYWORDS:E.coliO157,Shiga-toxin2,GICA,Antibodypurification,Reactionsystem,DetectionVII上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：高成秀日期：2008年2月25日I上

4、海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密?，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密?v。（请在以上方框内打“v”）学位论文作者签名：指导教师签名：高成秀严亚贤日期：2008年2月25日日期：2008年2月25日II上海交大硕士论文文献综述第一篇文献综述1大肠杆菌O157志贺毒素的分子

5、生物学大肠杆菌O157是肠出血性大肠杆菌中的主要血清型，它具有以下特性：①能够导致出血性结肠炎(HC)和溶血性尿毒综合征(HUS)；②表达志贺毒素(Stx)；③导致肠上皮细胞的黏附与消除(attachingandeffacing,A/E)病变；④具有编码溶血素等毒力因子的602MDa质粒。大肠杆菌O157可通过食物、水以及直接接触而传播，该菌[1]对人的感染与发病呈上升趋势，故引起了人们的广泛关注。1977年Konowalchuk等首次在大肠杆菌中发现一种对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)具有致死作用的细胞毒素并将其命名为Vero毒素(Verotoxi

6、n,VT)，随后发现这种毒素与志贺氏菌产生的志贺毒素相似，所以将其命名为志贺样毒素(Shiga-liketoxin,SLT)，后来的研究证明它们是同一类毒素。目前对由大肠杆菌O157及其他细菌所产生的志贺毒素尚未有统一命名，目前得到较多认可的命名是志贺毒素(Shigatoxin,Stx)。Stx是一种能够确定大肠杆菌O157的主要毒力因子，能够引起病人的死亡和HC、HUS等许多其他症状，鉴于Stx在大肠杆菌O157的致病性上的重要作用，目前对大肠杆菌O157毒力因子的研究主要集中在Stx上。1.1Stx的分子生物学研究Stx家族包括两个主要的，在免疫

7、学上没有交叉反应的部分构成，分别命名为Stx1和Stx2。一个大肠杆菌O157可以只表达Stx1或Stx2，也可以同时表达Stx1和Stx2。大肠杆菌O157的stx1编码序列与Ⅰ型痢疾志贺氏菌表达的stx的编码序列的同源性达99%，二者的氨基酸序列也仅有一个氨基酸的差异，且前者的生物学活性可被1上海交大硕士论文文献综述后者的多克隆抗体所中和。有些大肠杆菌O157菌株表达的Stx与志贺氏菌表达的Stx完全相同。Stx1与Stx2的A亚基有55%的编码序列相同，B亚基有57%的序列相同。虽然Stx1与Stx2的抗原性不同，但它们的分子结构、受体结构及作

8、用机理都相似。Stx1的编码序列高度保守，编码序列的变化主要存在于Stx2，故Stx2有多种不同的亚型。[2