rnai抑制bcl-2基因表达增强肺腺癌a549细胞放射敏感性的体外实验分析

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1、山东大学硕士学位论文符号说明缩略语英文名称中文名称RNAribonucleicacid核糖核酸RN础RNAinterferenceRNA干扰SiIⅢASmallinterferingRNA小干扰RNApBcl-2SiRNAplasmidwithtargartingBcl一2geneSiRNA含Be1—2小干扰RNA的质粒pNeg—SiRNAplasmidwithouttargartingBcl-2geneSiRNA含无意义序列的质粒A549／Bcl一2一InsA549celltransfectedwithpB

2、cl-2SiRNA转染pBcl-2SiRNAA549细胞A549／Bcl-2-NegA549celltransfectedwithpNeg—SiRNA转染pNeg-SiRNAA549细胞PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟SDSsodiumlaurylsulfate十二烷基硫酸钠DEPCdiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯TEMEDFITCAPSFBSNBSPBSDMSoPCRRTtetramethylethylenediamineN，N，N’，N’_甲

3、基7．--胺fluoresceinisothiocyanate。ammoniumpersulfatefatalbovineserumneonatalbovineserumphotophatebufferedsalineDimethylSulfoxidepolymerasechainreactionreversetranscription异硫氰酸荧光素过硫酸铵胎牛血清新生牛血清磷酸盐缓冲液二甲亚砜聚合酶链反应逆转录9原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中

4、已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：筠晕’E1关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定

5、)论文作者签名：雄导师签日山东大学硕士学位论文第一部分Bc卜2SiRNA转染肺腺癌A549细胞及其功能表达的检测实验一BcI-2SiRNA的制备和肺腺癌A549细胞的转染材料和方法1材料1．1细胞株人肺腺癌细胞株A549由山东大学齐鲁医院肿瘤中心实验室保存。细胞用含10％的FBS的RPMll640培养液，在37度，596C02孵箱中培养。1．2细胞培养液及其它实验用液1．2．1RPMll640培养基系Hyclone公司产品。RPMI1640培养液的配制：h1000mlRPMI1640培养液的配方a)RPlI

6、

7、t11640培养基粉末10．49b)NaHCO。32．Ogc)三蒸水定容至1000mlB．完全溶解后，充CO。气体以调整pH值为7．0。C．双层22um微孔滤膜加压过滤除菌、500ml玻璃瓶分装、检菌72h。D．-20"C冻存备用，使用前取出融化，加入新生牛血清，使其终浓度为10％，调整pH值为7．4。1．2．2新生牛血清(neonatalbovineserum，NBS)系GIBCO公司生产，血清在使用前经56℃灭活30min。1．2．3胰蛋白酶(Trypsin)为华美生物制品公司产品。0．25％胰蛋白酶的配

8、制：A称取所需重量胰蛋白酶。B加入所需体积D-Hanks液。C磁力搅拌混匀，使其完全溶解。D．0．22pm微孔滤膜过滤除菌、20mltJ,瓶分装、一200C冻存备用1．2．4----甲基亚砜(dimethylsuphoxide，DMSO)，分析纯为Sigma公司产品10山东大学硕士学位论文1．2．5磷酸盐缓冲液(PBS)、生理盐水1．3细胞培养主要仪器设备a)二氧化碳培养箱(美国Nuaire公司)：b)TDGL-1标准型超静工作台(苏州净化设备公司)：C)倒置相差显微镜(日本OLYMPUS公司)：d)TGL-

9、16G台式高速离心机(上海医用分析仪器厂)：e)20PR-520型低温高速离心机(日本HITACHI公司)：f)JB一90型定时磁力搅拌器(上海天平仪器厂)：g)LXJ—II型离心沉淀机(上海医用分析仪器厂)：h)SZ-I型自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)：i)H-1微型混和器(上海彭氏实业有限公司)：j)Ultrmark酶联免疫检测仪(美国Bio—RAD公司)：k)ZK-82B型真空干燥箱