高糖环境损伤enos-caveolin-1复合物影响骨髓内皮祖细胞功能的研究

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1、浙江大学硕士学位论文高糖环境损伤eNOS--Caveolin--1复合物影响骨髓内皮祖细胞功能的研究姓名：曹春丽申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：张楠201202浙江大学硕士学位论文中文摘要‘高糖环境损伤eNOS．Caveolin．1复合物影响骨髓内皮祖细胞功能的研究浙江大学医学院内科学(内分泌与代谢方向)硕士研究生曹春丽指导老师张楠老师中文摘要目的研究高糖在体外对大鼠骨髓来源内皮祖细胞的功能的影响及其分子机制，为糖尿病外周血管病变提供新的治疗靶点。方法密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞，EGM．2培养，荧光显微镜鉴定．内皮祖细胞(EPCs)摄取Dil．ac．LD

2、L，结合UEA．1lec恤双阳性，细胞免疫荧光VEGFR-2+，CDl33+。收集贴壁细胞并加入不同浓度葡萄糖使培养液终浓度分别为11．1mmo价、33．3mmoⅥ、55．5mmol／l。观察不同葡萄糖浓度下骨髓来源内皮祖细胞的增殖、迁移和体外血管生成能力的变化，采用westemblot法检测小凹蛋白CaVeolin-1和e_NOS蛋白水平的变化；RT-PCR检测Caveolill．1和e_NOS的心A浓度的变化，NO检测试剂盒检测细胞培养基中NO的水平。结果随着培养液中葡萄糖浓度的增高，骨髓来源的EPcs的增殖、迁移、成血管能力都逐渐减弱。CaVeolin．1mRNA和

3、蛋白浓度逐渐上升；eNOs111]刚A水平并无变化，蛋白水平下降；培养基中NO水平显著下降。结论高浓度葡萄糖对骨髓来源的EPcs的增殖、迁移、血管生成具有抑制作用，其对骨髓来源的内皮祖细胞的体外功能的损害作用可能是通过损害eNOs．caVe01in-1复合物，进而减少NO的合成来实现的。关键词：糖尿病；高糖；内皮祖细胞；eNos．caVe01in．1复合物IIHighglucoseconditionssuppressthefhnctionofbonemarrow—deriVedendothelialprogenitorcensviainhibitionoftheeNOS-

4、caVeolin—lcompIexDepartmentofEndocrinology，SirRunShawHospital，ZhejiangUniVersi锣，Postgraduate：ChunliCaoSuperVisor：T、hnZhangAbstract111epresemsm(1y如edt0reVeaJhowlli曲酉uCose疆’ectsratbonem姗w-d甜vedendothelialprogeIlitorcellsinvi訇ro．Tbtalmononuclearcellsofbonemarrowwercob洳ed，culturedinendothelia

5、lcellgrowthmedium．2a11didemi6edbyfluorescencemicroscopy．Usingi11mlunonuorescence，e11dotllelialprogeIlitorcellswereidentifiedbyexpressionofVEGFR-2aSwell笛CDl33锄dwere允nhercharacterizedaStlloseadherentcellsw11ichweredoublepositivebyDil．Ac．LDLuptal(eaIldFITC．UEA．1lectinbinding．Theattachedcells

6、werecollectedaIldglucosew勰addedtotheculturemediumat谢ous6nalconc即【trations(11．1，33．3觚d55．5mmoM)．Prolif．eration．migrationaIldinVinoangiogemcabilit)rofendothelialprogeIlitorcellsweremeaSured．TheChangeinmRNAaIldprotein1evelsofcaveolin．1a11dendomelialIli仃icoXides)，rlmase(eNOS)wereex锄ined；i11ad

7、dition，Ilitricoxide(NO)levelsinnlecellmedi啪weremeaSured．&峪edontheresults，witllincreaSingglucoseconcemrationiIltllemedium，prolif．eration，mi刚ionaIldiIlVi仃oa119iogemccapac时ofmecellswerereduced，w11ereaSIIl：RNAaIldproteinleVelsofcaVeoliIl-1geneincreaSedgradually．nemRNAle