glt-1在间歇低压缺氧预处理及脑缺血预处理中的作用

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1、河北医科大学硕士学位论文GLT--1在间歇低压缺氧预处理及脑缺血预处理中的作用姓名：弓淑娟申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：张敏201203中文摘要GLT一1在间歇低压缺氧预处理及脑缺血预处理中的作用摘要脑缺血耐受(brainischemictolerance，BIT)是指器官或组织经受一次或多次短暂的缺血发生后，可激发机体产生内源性保护机制，从而减轻后续脑缺血引起的损伤。近年来研究发现不仅是缺血，其他多种预处理方式如低氧、高温、化学药物等也可诱导脑组织对缺血损伤的耐受。本文分别通过间歇性低压缺氧预处理、脑缺血预处理两种方式诱导大鼠产生脑缺血耐受，探讨GLT-1在其中是否

2、发挥作用。间歇性低压缺氧(Intermittenthypobarichypoxia，IH)处理常常用来治疗和预防多种疾病，如高血压、冠心病、帕金森氏病和急性髓性白血病，而关于其治疗机制的研究正在进行，例如有报道称，IH预处理可以促进成年大鼠海马神经元的形成，发挥明显的抗抑郁类效应，而且间歇性暴露在低氧环境中其血清促红细胞生成素的表达量可以显著上调，此外IH预处理还可显著降低严重乏氧性缺氧打击后大鼠海马和新皮质区神经元的凋亡，减少行为异常和学习记忆能力的损害。基于上述证据，提示IH预处理可以诱导脑缺血耐受，但其机制尚不明了。我们前期的研究已证实胶质细胞谷氨酸转运体。1(glialglutam

3、atetransporter-1，GLT-1)，其为中枢神经系统最重要的谷氨酸转运体之一，参与整体情况下脑缺血预处理所诱导的脑缺血耐受；GLT-1的高表达参与海马CA3区和齿状回固有的缺血耐受。因此，我们推测，IH预处理有可能通过上调GLT-l表达诱导脑缺血耐受。本实验的目的在于探讨GLT-1在IH预处理诱导的脑缺血耐受中是否发挥作用，从而为将来脑缺血性疾病的防治提供实验依据。在脑缺血缺氧性损伤时，GLT-1的摄取功能会一过性降低，导致细胞外谷氨酸浓度明显升高，同时在海马可伴有天冬氨酸浓度的升高。抑制性神经递质Y一氨基丁酸有显著的神经保护作用，如中风后y一氨基丁酸的持续高浓度减弱了缺血后脑

4、组织的损伤。本实验通过脑缺血预处理的方式诱导脑缺血耐受，联合应用微透析技术与高效液相色谱技术，观察在脑缺血耐受诱导过程中脑内氨基酸类神经递质的变化，预先侧脑室注射GLT-1的特异性抑制剂D胍抑制GLT-1的功能，观察对上述过程中氨基酸类神经递中文摘要质的影响，则可以有效地反应GLT-1的功能变化卜为进一步确认GLT-1参与脑缺血耐受诱导提供证据。PPARy通_路被广泛认为是中枢神经系统的自我防御体系，参与减弱脑缺血再灌注的损伤，并发挥内源性保护作用。GLT-1是PPA砷的一个靶基因，PPART的激动剂罗格列酮能够引起GLT-1mRNA和蛋白表达上调，同时能够减轻严重氧葡萄糖剥夺所引起的神经

5、元死亡和谷氨酸释放。推测，CIP可能通过PPARy上调GLT-1的表达减弱缺血再灌注损伤。本室前期研究证明，CIP通过p38MAPK介导GLT-1蛋白表达的上调而诱导脑缺血耐受，而核转录因子．kappaB(nuclearfactorkappaB，NF．1<13)正是p38MAPK的下游信号分子之一。大量研究证明，NF．1出参与调控GLT-1的表达并在脑缺血时发挥重要作用，例如Ghosh等发现神经元通过NF．rd3调节星形胶质细胞的GLT-1转录，Tai等证实阿米替林通过NF．1(B引起吗啡慢性鞘内注射大鼠GLT-1及GLAST的表达上调。推测，CIP可能通过NF—rd3上调GLT-1表达减

6、弱缺血再灌注损伤。基于以上考虑，我们预先分别经侧脑室注射PPA脚的特异性拮抗剂GW9662及NF—vd3的特异性拮抗剂BAYl1—7082，通过动态观察海马CAl区谷氨酸、天冬氨酸和1，。氨基丁酸等神经递质浓度的变化，探讨GLT-1在脑缺血耐受中是否被PPAR7、NF．心信号通路调控。1IH预处理通过上调GLT-1表达诱导脑缺血耐受1．1方法：健康雄性Wistar大鼠(180．2209)57只，随机用于以下三部分研究：1．1．1IH预处理后GLT-1和GFAP的基础表达将12只永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠随机分为两组(n=6)：(1)sham组：即假术组，只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流

7、；(2)IH+sham组：IH预处理28d后，行假手术，即只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流。以上各组大鼠在假手术后即刻断头取材，各组分别取3只动物用于免疫组织化学，检测GLT-1和GFAP的表达；其余3只用于Westemblot分析GLT-1的表达。1．1．2IH预处理后全脑缺血大鼠GLT-1的表达将24只永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠随机分为4组(n=6)：(1)sham组；(2)IH+sham组；(3)损伤性缺血组：