nf-κb在脑缺血预处理激活p38mark上调glt-1表达诱导脑缺血耐受中发挥作用

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1、河北医科大学硕士学位论文NF--κB在脑缺血预处理激活p38MARK上调GLT--1表达诱导脑缺血耐受中发挥作用姓名：孙雅薇申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：张敏201203中文摘要NF-KB在脑缺血预处理激活p38MAPK上调GLT-1表达诱导脑缺血耐受中发挥作用摘要目的：预先给予短暂、轻微、不至于引起神经元损伤的脑缺血预处理，可以减少缺血．再灌注损伤，产生脑缺血耐受。脑缺血预处理诱导脑缺血耐受，已被大量的研究所证实，但其发生机制至今尚未阐明。NF．心是从B淋巴细胞核中检测到的一种能与免疫球蛋K轻链基因的

2、增强子1出序列特异结合的核蛋白因子。非活化状态NF．KB以Ir．B聚合的三聚体形式或与前体蛋白聚合的二聚体形式存在于胞浆中，在缺血缺氧等刺激作用下，通过多种信号途径Ir．B发生磷酸化并与NF．r,B解聚，NF．KB被激活，将信息从胞浆传至胞核并启动相关靶基因的转录。此外，有的研究发现，还有一些独立于Ird8的信号，如p38MAPK可以对NF．出进行磷酸化修饰，调节其活性，使其更有效地促进基因转录【l21。我室既往研究发现，脑缺血预处理通过p38MAPK通路上调星形胶质细胞谷氨酸转运体．1(glialglutamatetran

3、sporter-1，GLT-t)大量表达而诱导脑缺血耐受：NF．v．B的特异性抑制剂BAYl1-7082剂量依赖性阻断脑缺血预处理所诱导的脑缺血耐受。但脑缺血预处理是否通过p38MAPK信号转导途径影响NF．v,B信号通路而引起GLT-1的大量表达，尚有待阐明。为此，本实验旨在观察NF．心在脑缺血预处理激活p38MAPK上调GLT-1表达诱导脑缺血耐受中是否发挥作用。方法：健康雄性Wistar大鼠(280---一3209)198只，首先永久凝闭椎动脉，恢复2天后，随机分为以下三部分：1脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中NF．v

4、d3p50、NF—KBp50／p65二聚体复合物、NF．v．BDNA结合活性的变化具体分组如下：@sham组(n=27)：只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流；②脑缺血预处理(cerebralischemicpreconditioning，CIP)组(n=27)：夹闭双侧颈总动脉3min，然后恢复血流再灌注；③损伤性缺血(ischemicinsult，II)组(n=27)：夹闭双侧颈总动脉8min，然后恢复血流再灌注；@CIP+II组(n=27)：夹闭双侧颈总动脉3min作为脑缺血预处理，再灌注中文摘要2天后，夹闭双侧颈总动脉8m

5、in作为损伤性缺血，然后恢复再灌注。各组均分为9个时间点，即假手术或末次缺血后0min、15min、30min、3h、6h、1d、2d、4d、7d(每个时间点n=3)。在规定的时间点，断头取海马脑组织，应用westemblot方法来观察NF．r,Bp50蛋白表达的变化，免疫共沉淀(Co．immunoprecipitation)方法来观察NF一1cBpS0／p65二聚体复合物表达的变化，采用电泳迁移率变动分析(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)观察NF—rd3DNA结合活性的变化。2

6、p38MAPK的特异性抑制剂SB203580对脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中NF．r．Bp50、NF．1①p50／p65二聚体复合物、NF—KBDNA结合活性的影响具体分组如下：①DMSO+CIP+II组(n=18)；②SB203580+CIP+II(n=18)。脑缺血预处理前30min侧脑室注射3％DMSO或SB2035805nmol，然后夹闭双侧颈总动脉3min作为脑缺血预处理，再灌注2天后，再次夹闭双侧颈总动脉8min作为损伤性缺血，而后恢复再灌注。于末次缺血后即刻(0min)、3h、6h、1d、4d、7’d时取海马

7、脑组织(每个时间点n=3)，探讨p38MAPK信号转导通路对NF．1(Bp50蛋白、NF—KBp50／p65二聚体复合物、NF．1出DNA结合活性的影响。3NF．vd3的特异性抑制剂BAYl1-7082对脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中GLT-1蛋白表达的影响具体分组如下：@DMSO+CIP+II组(n=18)；@BAYl1-7082+CIP+II(n=36)。脑缺血预处理前30分钟侧脑室注射3％DMSO或BAYll-7082，再灌注2天后，夹闭双侧颈总动脉8min作为损伤性缺血，而后恢复再灌注。根据BAYl1-7082剂量

8、不同，又分成1．25nmol、2．5nmol2个亚组，每个亚组n=18。于末次缺血后即刻(0min)、3h、6h、1d、4d、7d时取海马脑组织(每个时间点n=3)，采用Westernblot法观察GLT-1蛋白的表达，研究NF．KB的特异性抑制剂BAYl1-7082对GLT-1蛋白表达的