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1、甘蓝型油菜叶片组织培养体系优化摘要：以甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)叶片为材料，分析了影响油菜叶片离体培养的关键因素一一基因型、基本培养基、激素配比及外植体取材时间，优化了油菜叶片组织培养体系。结果表明，关键词：油菜(BrassicanapusL.)；叶片；组织培养中图分类号：S565.4文献标识码：A文章编号：0439-8114(2014)02-0447-03TheOptimizationofRegenerationSystemofRapeseed(BrassicanapusL.)Lea
2、fSHENJing-jinga,LIAOYu-caib,LIHe-pinga(a.MoleculerBiotechnologyLaboratoryofTriticeaeCrops/CollegeofLifeScienceandTechnology；b.MoleculerBiotechnologyLaboratoryofTriticeaeCrops/CollegeofPlantScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070,C
3、hina)Abstract:UsingleafasexplantsfromBrassicanapusandfocusingonfactors(genotype,basicmedia,thehormonescombinationsandseedingageofexplants)affectingtheleavesregenerationinvitro,aneffectiveregenerationsystemwasestablished・TheresuItsshowedthatMS+4mg/L6~BA+0
4、.5mg/LNAAwasbestforshooting,withdifferentiationandregenera/tionrateof75.2%and28.1%,respectively1/2MS+1mg/LIBAwasbestforrooting,withtherootingrateof100%.Theexplantsofdifferentseedingagefromthesamegenotypeshowedgreatdifferenceofshootingdifferentiationandre
5、generationcapability.The22-dayleafofF4cultivarwasthebestexplantfortissueculture・Keywords:BrassicanapusL.；leaf；tissueculture油菜(BrassicanapusL.)是我国主要的油料作物之一［1］。近年来，随着髙等植物转基因技术的不断发展和应用，油菜高频率植株再生组织培养体系是进行外源基因遗传转化的基础，因此，探讨油菜离体培养中不定芽分化和成苗的影响因素具有重要意义。自1974年Kart
6、ha等［2］首次从甘蓝型油菜的茎切段组织培养诱导分化获得植株以来，花序轴⑶、带柄子叶［4,5］、下胚轴［6,7］、叶片［8-10］和子叶［11,12］等外植体被成功应用于油菜离体诱导获得再生植株。本研究主要以F4和T15油菜品系的子叶为外植体，筛选合适于组织培养的基因型；以F4第18、22天苗龄的叶片为外植体，进一步优化了分化和生根培养基，建立了甘蓝型油菜F4品系叶片的再生体系，为通过油菜叶绿体转基因技术获得优良性状的甘蓝型油菜奠定了基础。1材料与方法1.1供试材料油菜F4和T15品系由华中农业大学作物
7、遗传改良国家重点实验室提供。1.2培养基1.3方法1.3.1种子的消毒与无菌苗的获得挑选种皮完好、饱满的油菜种子，70%乙醇消毒2min,无菌水冲洗1次,15%H202灭菌35min,无菌水冲洗3次。将种子置于B5基本培养基中培养2d。挑选长势一致的健壮幼苗移至B5基本培养基中继续生长。培养温度25°C,光照强度为2000lx,16h/8h（光照/黑暗）。1.3.2愈伤组织的诱导及分化挑选5〜6d的子叶，将子叶切成3mmX3mm大小，置于愈伤诱导培养基中。诱导培养8周后，转分化培养，每2周继代一次。诱导
8、培养2周时统计愈伤诱导率，分化培养4〜6周时进行分化率和成苗率统计，试验设3个重复。愈伤诱导率二产生愈伤组织的外植体数/接种的总外植体数X100%；分化率二至少分化出一个根或芽的外植体数/接种的总外植体数X100%；成苗率二至少出现一株苗的外植体数/接种的总外植体数X100%o1.3.3不同分化培养基对外植体芽、苗分化的影响取苗龄18、22d的叶片作为外植体，将叶片切成3mmX3mm大小，愈伤诱导培养基均为A,愈伤组织接种到不同分化培养基上
