甘蓝型油菜DH系培养技术优化

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1、万方数据安徽农业科学。JournalofAnhuiA甜．Sci．2008，36(32)：13972—13974．14059甘蓝型油菜DH系培养技术优化李超1’2，林茂1，肖华贵卜，杨斌1，饶勇1(1．贵州省油料研究所。贵州贵阳550006；2．西南大学农学与生物科技学院，重庆400716)责任编辑段永波责任校对昊晓燕摘要[目的]研究消毒处理方式、培养基成分和胚状体培养方法对油幕游离小孢子培养的影响。【方法]以B，培养基为基础培养基．添加不同浓度的蔗糖、琼脂及不同激素组合进行试验。对油菜DH系的组培技术进行优化。[结果]舍2％d‘的NaCIO消毒15min与0．

2、1％Hl；cl，消毒10rain培养效果较好，都能达到良好的消毒和产胚效果；在游离小孢子提取的过程中，B，液体培养基中蔗糖浓度为2％时能达到较好的产胚效果；小孢子培养首先在32qc暗培养5～7d，然后25℃暗培养12—15d，最后25℃振荡暗培养3～7d胚状体就可完全成熟；1／2MS培养基(附加I．2％琼脂+0．02％NAA+2．0ms／L6一BA+3．4mg／LAgNO，+2％蔗糖)有利于胚的分化和苗的形成，其褐化程度小，玻璃化程度低。[结论]该研究结果有助于甘蓝型油菜DH系的规模化生产及高效转化体系的建立。关键词甘蓝型油莱；DH系；培养基；胚状体中图分类号

3、s565．4文献标识码A文章编号∞17—661l(2008)32—13972—03OptimizationofCultll弛TechniquesforDHLineinBrassicaBaplK‘；L．LIChaoetal(OiICropsInstitute．GuizhonAcademyofAgricuhuralSciences，Guiyang，Guizhou550006)AbstraetObjective]TheaimofthisstudyjStorevealthedisinfectantsanddisinfectionmetI】ods，mediumcompo

4、nents，andembryoidculturemethodondissociativemicrosporeculture．『Method1B‘1t8basicmediumappendedwithdifferentconcentrationsofsucrose，agaranddifie·renthormonecombinationsw∞usedtOoptimizetheculturetechniqueforDHlineinBrasswa加pwL．IResultBoththe15raindisinfectionofNa-ClOcontaining2％Cl-and

5、10mindisinfeetionof0．1％H正l，performedwellindisinfectionandsubsequentembryoproduction；inthee—xtrae-tionprocessofdissociativemierospores，B‘mediumcontaining2％sucr(ysecouldachieveagoodembryoproductioneffect；underdarkconditionmicrosporeswerefirstlyincubatedat32oC5—7d。thenat25℃12一15d。andfi

6、nallytransferredto25℃oscillator(60—65r／rain)for3—7d。whentheembryoidwouldbecomefullripeness；!／2MSmediumappendedwith1．2％agar。0．02％NAA，2．0ms／L6-BA，3．4nw,／LAgN03and2％sucroflewashelpfulforembryoiddifferentiationandplantletgeneration，presentinglowdegreeofbrowningandslishtvitrifica-tion．fC

7、onclusion1neresultsmayfacilitateDHLiBeinrapeproductioninlargescaleandhig}leffieienttransformationsystem．KeywordsBrassica，卿泌L．：DHline；Modium：Embryoid在上世纪80年代以前，油菜新品种的选育主要依赖于花药培养技术，直至1982年Lichter一。通过甘蓝型油菜游离小孢子培养技术进行单倍体育种。由于甘蓝型油菜游离小孢子的分离过程简单，且容易通过游离小孢子培养技术获得胚状体和再生苗，因此，该技术受到了各国油菜育种家的普遍关

8、注。许多研究者报道了影响油菜小孢子胚状