全氟化碳对脂多糖诱导急性肺损伤a549细胞表面活性蛋白影响

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1、解放军医学院硕士学位论文军医进修学院研究生学位论文原创性声明秉承我院“敬业、勤奋、求实、创新”的学风，本人声明：所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料，对本文的研究作出贡献的个人或集体，均已在文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：指导教师签名：日期：军医进修学院研究生学位论文版权使用授权书本人

2、保证毕业离院后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为军医进修学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原件、复印件和电子版本，可以采用影印、缩印、扫描或其它手段保存论文以供被查阅和借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外）。论文作者签名：日期：指导教师签名：日期：2解放军医学院硕士学位论文目录一、中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（1）二、英文摘要(ABSTRACT)„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（3）三、论文前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„

3、„„„„„（5）第一部分A549细胞急性肺损伤模型的建立„„„„„„„„„„„„（7）第一节LPS实验浓度的选择„„„„„„„„„„„„„„„„„„（7）第二节PFC实验浓度的选择„„„„„„„„„„„„„„„„„„（15）第三节讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（20）第二部分全氟化碳对脂多糖诱导急性肺损伤A549细胞表面活性蛋白的影响„„„„„„„„„„„„„„„„„（23）第一节全氟化碳对脂多糖诱导急性肺损伤-A549细胞表面活性蛋白mRNA表达的影响„„„„„„„„„„„„„（23）第二节全氟化碳对脂多糖诱导急性肺

4、损伤-A549细胞表面活性蛋白表达的影响„„„„„„„„„„„„„„„（29）第三节讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（41）第三部分全氟化碳对脂多糖诱导急性肺损伤A549细胞ABCA3、TTF-1的影响„„„„„„„„„„„„„„„„„（45）第一节材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（45）第二节结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（47）第三节讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（48）结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（51）参考文献„„„„

5、„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（53）四、附录综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（57）3解放军医学院硕士学位论文英文缩写表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（61）攻读学位期间发表文章情况„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（62）致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„（63）4解放军医学院硕士学位论文全氟化碳对脂多糖诱导急性肺损伤A549细胞表面活性蛋白的影响中文摘要目的：经全氟化碳（perfluorocarbon，PFC）治疗脂多糖（lipopol

6、ysaccharide，LPS）致急性肺损伤（acutelunginjury,ALI）A549细胞模型，探讨PFC对ALI人肺泡上皮细胞表面活性蛋白的影响。6方法：实验共分为四组：（1）、空白对照组（C组）：含有A549细胞（10/ml）6的培养液；（2）、脂多糖组（L组）：含有A549细胞（10/ml）的培养液加入10ug/ml6脂多糖溶液；（3）、全氟化碳组（P组）：含有A549细胞（10/ml）的培养液加入30%（V/V%）全氟化碳溶液；（4）、脂多糖+全氟化碳组（L+P组）：含有A5496细胞（10/ml）的培养液加入10ug/ml

7、脂多糖及30%（V/V%）全氟化碳溶液。各组实验标本均设定6个观察时间点：1h、2h、3h、4h、5h、6h，每个时间点配制为总体积1ml混合溶液装入离心管（1.5ml），经超声振荡三次，每次振荡5秒钟，间隔20秒，分别于每个时间点提取A549细胞（离心5000rpm×5min），－20℃保存备实验用。第一部分：（1）、应用实时荧光定量PCR（Real-timeQuantitativePCR,q-PCR）检测技术分别检测C组与L组炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达情况，确定ALI细胞损伤模型的建立；（2）、将P组按PFC浓

8、度分别为10%、30%、50%、70%分成四个亚组，与C组对照进行实验并应用q-PCR技术检测表面活性蛋白SP-D和相关蛋白TTF-1mRNA表达情况，确定PFC的作用浓度。第二