积雪草苷对脂多糖诱导急性肺损伤的白细胞介素

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1、积雪草苷对脂多糖诱导急性肺损伤的白细胞介素作者：章卓姜鲜万敬员李华李亮张红【摘要】　　目的观察积雪草苷对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）白细胞介素-10（IL-10）、血红素氧合酶（HO-1）影响。方法40只Balb/c小鼠随机分为空白组，模型组，积雪草苷5,15,45mg·kg-15组，每组8只。脂多糖（2.5mg·kg-1）气管滴注造急性肺损伤模型，24h后处死小鼠，免疫印迹法检测肺组织HO-1蛋白表达，ELISA法检测血浆IL-10表达。结果积雪草苷各剂量组呈剂量依赖性增加脂多糖所致急性肺损伤模型肺组织HO-1蛋白

2、和IL-10表达。结论积雪草苷对LPS诱导急性肺损伤保护效应可能与促进HO-1表达和IL-10含量有关。【关键词】积雪草苷脂多糖急性肺损伤抗炎因子　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofasiaticoside(AS)onHO-1andIL-10ofacutelunginjury(ALI)inducedbylipopolysaccharides(LPS).Methods40Balb/cmicelydividedintocontrol,model,model+asiaticoside5,15

3、,45mg·kg-1groups.ModelofALIg·kg－1）.Miceae-linkedimmunosorbentassay(ELISA).ResultsAScouldincreasethecontentsofHO-1oflungandIL-10inplasmainadose-dependentmanner.ConclusionAShasprotectiveeffectonALIinducedbyLPSandthemechansimmayberelateda.　　Keymatoryfactors　　急性肺损伤(acute

4、lunginjury,ALI)是以肺血管内皮细胞及肺泡上皮细胞广泛损伤为病理特征的一种失控的炎症反应［1］，起病急而严重，国内发病率和病死率达20%~40%，尤其在ICU病房中更是高达50％左右［2］。体内失控性释放的大量炎症介质与抗炎因子间的平衡决定了ALI的发展，血红素氧合酶-1(HO-1)和白细胞介素-10(IL-10)作为炎症过程中重要的两个抗炎介质，在ALI发病过程中扮演着重要角色。积雪草苷（Asiaticoside，AS）为积雪草Centellaasiatica(L.)Urb.提取物三萜皂苷的主要成分之一［3］，目前

5、积雪草苷研究主要集中在对抑郁和伤口愈合的治疗上，研究显示积雪草苷对革兰阴性菌感染，在10mg/kg即可抑制NO等炎症因子表达［4］。但对于抗炎因子研究还未见相关报道。本课题组前期研究已经证实积雪草苷对脂多糖（LPS）诱导ALI有保护作用，因此本研究通过复制LPS诱导的ALI小鼠模型，观察血清IL-10和肺组织匀浆HO-1的表达，明确积雪草苷对LPS诱导的ALI保护效应是否与促进HO-1和IL-10表达有关。　　1器材　　1.1药品与试剂积雪草苷，广西昌洲天然产物开发有限公司，批号，20061478,纯度95％。LPS（sigma

6、，L2880）。BCA试剂盒，Pierce公司。IL-10酶联免疫吸附法试剂盒，Cayman化学公司。兔抗鼠β-actin和兔抗鼠HO-1IgG单克隆抗体以及辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG抗体，Abcam公司。　　1.2动物Balb/c小鼠，雌雄各半，18~22g，10周龄，由重庆医科大学动物中心提供,合格证号：SYXK(渝)2002007。　　1.3仪器3K30型超低温离心机（sigma,德国），PAC300型垂直型电泳槽和湿式电转膜槽转膜仪（bio-rad,美国），550型酶标仪（bio-rad,美国）。　　2方法　　2.

7、1分组与给药将40只Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组（LPS2.5mg·kg-1）及积雪草苷小、中、大（5，15，45mg·kg-1）剂量组，每组8只。积雪草苷溶解于0.5％羧基纤维素钠。药物组造模前连续灌胃3d，空白组和模型组给予等量蒸馏水。　　2.2急性肺损伤模型的建立［5］3％水合氯醛(0.3g·kg-1，ip)麻醉小鼠，颈部正中切口5mm，分离气管，微量注射器由气管向肺方向滴注LPS溶液（2.5mg·kg-1），1min内滴注完毕，消毒缝合切口，小鼠保温护理。　　2.3免疫印迹法检测HO-1蛋白表达ALI建模后24

8、h处死动物，取肺组织放于EP管中，-80℃保存。准确称量肺组织100mg，加入含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解液1ml，冰上匀浆，超声波断裂蛋白，转入1.5mlEP管中，4℃，12000g×15min，吸取上清，BCA法测量蛋白浓度。配好4％浓缩胶和10％分离胶后加样