抗高血压大豆肽营养液的开发研究——抗高血压肽的分离提纯及体内外活性研究

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1、大连轻工业学院硕士学位论文抗高血压大豆肽营养液的开发研究——抗高血压肽的分离提纯及体内外活性研究姓名：黄朝明申请学位级别：硕士专业：食品科学指导教师：孔繁东20060401摘要本论文是在上届论文确定的酶解条件基础之上，将大豆蛋白酶解液进行预处理，上样后通过单因素试验确定凝胶过滤色谱最适分离条件，绘制分子量标准曲线，并对分离液进行血管紧张素转化酶(AagioensiaConvertingEnzyme，简称ACE)体外抑制实验，最终确定分离出的抑制活性高的组分的分子量范围，完成降血压肽的分离过程。在凝胶分离上采用Sep

2、hadexG．25进行分组分离和SephadexG．15进行成分分离连续顺次性的分离方法。本论文还进行了自发性高血压症大鼠(SpontaneouslyHypertensiveRats，简称SHR)动物实验，对酶解产物的稳定性进行了研究。研究结果表明：确定了凝胶过滤色谱的最适分离条件。在分组分离中，SephadexG-25Medium分离的最适条件为：上样量5mL，酶解液2倍浓缩，洗脱流速2mL／6min，单管收集量2mL。后改用SephadexG．25Superfine分组分离，其最适分离条件为：上样量5mL，酶解

3、液2倍浓缩，洗脱流速2mL／Tmin，单管收集量2mL。进行组分分离，使用SephadexG-15分离的最适分离条件为：上样量2mL，分组分离样4倍浓缩，洗脱流速2mid8mill，单管收集量2mL。绘制分子量标准曲线并进行体外ACE抑制实验。SephadexG-25Medium分组分离的洗脱曲线将组分分成6组，效果最好组别的ACE抑制率为86．70％，分子量范围为1440—780Da。之后改用SephadexG．25Superfine分组分离，对应的最好组别ACE抑制率为92．78％，分子量范围为1440彳10D

4、a，分离曲线得到很大程度的改善。使用SephadexG-15组分分离，分成6个洗脱峰确定抑制效果最好的为第3个洗脱峰，ACE抑制率为71．04％，分子量范围为1060-790。分析其成分为8—10个左右氨基酸残基的多肽。通过管数计算酶解产物的分离最终产率为4．55％。通过分离实验和体外ACE抑制实验发现，降血压肽并不是集中在某一个肽段，其分子量分布在一个很广的范围内均有AcE抑制活性，只是抑制率高低不同。SHR动物实验表明：木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白1h的水解物的降血压活性最高，SHR灌胃2h后血压下降为18．4m

5、mHg。酶解产物的稳定性研究表明：样品分别采用常温和高温杀菌处理，SHR灌胃2h后血压分别下降了13．5mmHg和10．2mmHg；对样品调酸后杀菌与不杀菌，SHR灌胃2h后血压分别下降l一3mmHg和18mmHg左右。关键词：降血压肽，分离，AcE抑制，凝胶过滤色谱，SHRAbstractAbstractThisthesisisbasedonthecertainconditionofenzymatichydrolysiswhichcomesfromlastpaper．Soybeanproteinhydrolyze

6、dliquidbeenmadepretreatmentfirst，thenascertainthebestseparateconditionofgelf'fltrationchromatographybysinglefactorexperiment，protractmolecularweightstandardculve，andcarriedontheouterbodyACE(AngloensinConvertingEnzyme)inhabitionexperiment，finallyco渤themolecular

7、weightrangeofthehighestinhabitionrate．ThisexperimentuseSephadexG-25forgroupingseparationandSephadexG-15forcomponentseparationinsuccession．AlsoanimalSpontaneouslyHypertensiveRats(short弱SHR)experimentshadbeentaken，investigatethestabilityofthesample．Theresultofre

8、searchindicates：ThebestseparatingconditionsofGelfiltrationchromatographyhavebeenensured．Inthecourseofgroupingseparation，thebestseparatingconditionsinusingSephadexG·25Medium：5mLinje