木糖还原酶基因克隆及表达菌株的代谢工程改造

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1、木糖还原酶基因克隆及表达菌株的代谢工程改造⑧指导教师签名：论文评阅人1：邀筮垫!蜀评阅人2：邀鱼婆国评阅人3：监!堡婆闺评阅人4：逸!鱼婆亟评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：答辩日期：煎迭熊玉囡l殳BXyloseReductaseGeneCloneandExpressionStrainofMetabolicEngineeringTransformAuthor’Ssignature：～‘●‘Supervisor7Ssignature：Thesisreviewerl：Thesisreviewer2：Thesisrev

2、iewer3：Thesisreviewer4：Thesisreviewer5：ExaminingCommitteeChairperson：ExaminingCommitteeMembers：Committeeman1：Committeeman2：Committeeman3：Committeeman4：Committeeman5：Dateoforaldefence：浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成

3、果，也不包含为获得逝婆太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：垒．静雨签字日期：如l忙钥IO日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝江太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝婆太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：垒、静两签字日期：如4年弓月Io日导师

4、签名：签字日期；硒N年3月f锣日致谢岁月如歌，光阴似箭，伴随着毕业论文的答辩，短暂的硕士学习阶段即将结束，也即将开启一段崭新的旅程。回首我的研究生生涯，一路走来，我要感谢一路陪我走过来的老师、同学、家人和朋友们，谢谢你们的包容、关心、鼓励与支持。由衷地感谢我的导师吴绵斌副教授、林建平教授，他们深厚的理论基础、活跃的思维、绝好的脾气、平和的心态给我留下了深刻的印象，使我受益匪浅。从事基因方面的研究对我来说是个很大的挑战，薄弱的基础，不自信的实验操作，极大地考验我的耐心和自信，然而每个在我看来不可逾越的坎面前，吴老师和林老师的及时指导总能给我拨开云

5、雾见日出的感觉，让我不再惶惶恐恐，让我在不扎实的科研过程中又找到坚持的方向和解决问题的办法。另外他们对大家的关心和包容是最让我印象深刻的，老师温和的脾气、平和的心态、无条件的包容，这些无不让我们心存感激，也让我们在感受着他们的宽容和关爱的同时，学习他们的宽容和关爱，去善待他人。三年的研究生生涯虽然短暂，但老师对我的教诲对我的一生都将产生重要的影响。在此，学生向您表示最诚挚、最衷心的感谢。感谢三年以来与我互勉共励的课题组全体成员，特别感谢博士生闻志强、苏卜利、王涛、袁建峰等，硕士生张正玉、刘超超、王如涛、王明璐、赵炯烽、漏佳伟、陈永露、张尧、张菲

6、菲、张哲、乔沛等，在他们身上，我学习到了很多，他们拥有扎实的理论基础、优秀的科学素养、良好的实验习惯，慢慢地在他们的熏陶下，我也改正了一些不好的>--j惯，努力地以更高的标准来要求自己。本人能顺利完成学业，与父母、亲人、朋友的关心、帮助和激励是分不开的，在此向父母、亲人、朋友表示衷心的感谢和深深的敬意。她们不仅在学业上，还在生活上给予了我许多帮助。向所有关心和帮助过本人的老师、同学、朋友和亲人再次表示衷心的感谢!焦静雨二零一四年一月于求是园摘要木糖醇是一种五碳糖醇，其化学名称为1，2，3，4，5．戊醇，分子式为C5H1205，是一种白色结晶，它

7、的溶解度、溶液密度和折光系数等理化性质与蔗糖基本相同，可以作为蔗糖的替代品和糖尿病人的营养剂而受到人们的关注。本文首先通过PCR从粗糙脉胞菌(Neurosporacrassa)基因组中获得目的基因木糖还原酶基因(xr)，构建表达质粒pET30a．xr，并分析重组质粒在E．coliBL21(DE3)中的表达情况。结果表明分子量大小为38kDa的木糖还原酶(XR)能有效表达，重组菌株XR的比酶活为7．25U／mg。其次，XR为NADPH依赖型的酶，本文通过PCR从大肠杆菌K-12基因组中分别获得辅酶再生基因6．磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因(grid)和葡

8、萄糖．6．磷酸脱氢酶基因(zwf)，构建表达质粒pCDFDuet-grid、pCDFDuet-zwf、pCDFDuet-gnd．zwf，并分析重组质粒