酶抑制法在快速检测蔬菜中农药残留应用中的探讨

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1、犇犗犐：１０．１１９７３／犾犺犼狔犺狓２０１６０５０１５酶抑制法在快速检测蔬菜中农药残留应用中的探讨王毅红，徐为霞，郭智广（郑州市农产品质量检测流通中心，郑州４５０００６）中图分类号：Ｏ６５７．３２文献标志码：Ｂ文章编号：１００１４０２０（２０１６）０５０５５８０３目前，蔬菜中农药残留的快速检测方法有国家基苯甲酸）均按照试剂盒说明书进行配制，于０℃～标准ＧＢ／Ｔ５００９．１９９－２００３和行业标准ＮＹ／Ｔ５℃冰箱中保存。４４８－２００１。两者中都有采用酶抑制法测定蔬菜中试验用水为二次去离子水。的有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留，

2、该法具有简１．２仪器工作条件便、快捷、经济的优点，对操作人员、样品处理和检测工作电压为２２０Ｖ、６０Ｈｚ，使用光源为钨灯环境要求较低，在市场上容易推行，是我国目前控制Ｗ１、氘灯Ｄ２，光源自动切换，测量模式为时间扫描，高毒农药残留的一种有效手段［１］。现在市场上使用测定波长４１２ｎｍ，狭缝宽为１．５ｎｍ，测量时间为的速测试剂盒大都是依据这两项标准生产的，但由１８００ｓ，时间间隔为２ｓ。于生产厂家众多，所采用酶的来源不同，对反应条件１．３试验方法的要求也不尽相同，时常会出现假阳性或假阴性的取一支洁净的试管，分别加入样品提取液结果，结果的可

3、比性差，导致速测结果的不可靠，文２．５ｍＬ、显色剂１００μＬ、酶１００μＬ，摇匀，于３７℃恒温水浴锅中反应１５ｍｉｎ后，加入底物１００，摇献［１３］对此有报道。μＬ匀后迅速倒入比色皿中，用分光光度计在波长本工作针对目前存在的上述问题，对不同厂家的速测试剂盒酶的活性与抑制率的关系等进行研４１２ｎｍ处测量吸光度。空白对照试验用２．５ｍＬ缓冲溶液代替样品提取液进行测定。当样品对酶的抑究，旨在探讨酶抑制法在快速检测农药残留应用中制率不小于５０％时，表示蔬菜中有高剂量的有机磷存在的问题，并提出合理的建议，为使农残速测结果或氨基甲酸酯类农药存在

4、。抑制率的计算公式为：更加可靠提供科学依据。抑制率（％）＝Δ犃０－Δ犃ｔ×１００（１）Δ犃０１试验部分式中：Δ犃０为对照溶液反应３ｍｉｎ吸光度的变化值；１．１仪器与试剂Δ犃ｔ为样品溶液反应３ｍｉｎ吸光度的变化值。ＵＶ２３１０ＩＩ型紫外可见分光光度计，ＴＴＮＪ３２２结果与讨论型农残快速测定仪，ＤＺＫＷ型电子恒温水浴锅，５个不同厂家生产的农残速测试剂盒（均为乙酰胆碱酯２．１不同厂家试剂盒的酶活性分析酶）。试验对５个不同厂家提供的速测试剂盒进行了氧化乐果、敌百虫、灭多威农药标准储备溶液：酶动力学反应曲线（吸光度随时间的变化）研究，结１０

5、００ｍｇ·Ｌ－１，使用时稀释至所需质量浓度。于果见图１。其中，Δ犃０均大于０．３，满足国家标准方－１５℃左右冷冻保存。法的要求。１号试剂盒的酶促动力学曲线在４５０ｓ底物（硫代乙酰胆碱溶液）、缓冲溶液（磷酸氢二发生了弯曲，吸光度犃达到１．６，３号、４号试剂盒的钾和磷酸二氧钾的混合溶液）、显色剂（二硫代二硝酶促动力学曲线拐点分别在６００，７００ｓ左右，随着时间的延长，吸光度不呈线性，但吸光度一直曲折上收稿日期：２０１５０５０３升直至平滑；２号和５号试剂盒的酶促动力学曲线·５５８·王毅红等：酶抑制法在快速检测蔬菜中农药残留应用中的探讨拐

6、点分别出现在８８４，８５０ｓ，此时的吸光度达到２．７能否在一级反应时间内完成测试是一个很值得关注左右。从５个试剂盒的酶促动力学曲线可知：酶和的问题。ＧＢ／Ｔ５００９．１９９－２００３中仅要求酶试剂底物反应时间持续最长的是２号，达到１４．７ｍｉｎ，Δ犃０大于０．３即可使用，而从图１中可以看出：反应最短的是１号，为７．５ｍｉｎ。按照抑制率计算公式，体系的吸光度已大于１，市售速测仪性能指标中大当酶促反应的一级反应结束（即出现拐点）后，进行多未标注吸光度范围，仪器在高吸光度下的光度准空白对照测试，会造成Δ犃０变小，出现假阴性结果；确性有待进一

7、步探讨。建议在使用不同厂家的试剂同理，如果空白在一级反应时间内测定，样品测试时盒时应先测试一级反应时间，保证每个上机液控制间超过拐点可能导致Δ犃ｔ变小甚至趋近于零，出现在一级反应时间内完成。试验还发现，使用同一试假阳性结果。剂盒检测，结果再现性存在很大差异，这可能与测试［４］温度和机器的状态有关。因此，每一批样品都应做空白对照，不得调用以往对照值，并且测试在一级反应时间内完成，这样才能保证检测结果的准确性。２．２酶的活性对抑制率的影响试验选择几种常见的农药如氧化乐果、敌百虫和灭多威等进行考察。因在实际工作中，酶对氧化乐果不敏感，对敌百

8、虫和灭多威等比较敏感，试验配制了８ｍｇ·Ｌ－１氧化乐果溶液、０．０１２ｍｇ·Ｌ－１敌图１不同厂家试剂盒的酶促动力学曲线百虫溶液和０．８ｍｇ·Ｌ－１灭多威溶液。酶的活性以Ｆｉｇ．１Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｋｉｎｅｔｉｃｓｃｕｒｖ