左归丸对衰老大鼠间充质干细胞增殖与分化实验研究

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名让Et期：矽午年∥月弓Et关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或

2、部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名辑论文导师签名日期：沙-}年f月弓日摘要IIIIIIIIPIIPIIIIPIIIIHIIIIIIIJJIIlY2623128目的：在中医学“肾精亏虚”致衰老论及“干细胞具先天之精属性，是先天之精在细胞层次的存在形式"理论的指导下，探讨补肾益精代表方左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(MsC)增殖与分化的影响。把中医药延缓衰老与干细胞研究相结合，从干细胞角度研究补肾益精法抗衰老的作用机理。为深入揭示中医药延缓衰老的机制研究提供创新性的

3、思路，为左归丸应用于临床抗衰老的保健与治疗提供有力的实验依据。方法：1、选用3月龄SD大鼠，雌雄各半，通过腹腔注射D一半乳糖造模，制备衰老大鼠模型。选用补肾益精代表方左归丸水煎剂对模型大鼠灌胃治疗。2、运用全骨髓贴壁法分离、培养MSC，光镜观察各组大鼠MSC一般形态学特征，电镜观察各组大鼠MSC的超微结构特点。3、观察正常组、模型组、左归丸组大鼠MSC细胞形态、生长曲线、生长周期、B一半乳糖苷酶衰老细胞染色结果，比较各组大鼠MSC增殖能力。4、观察正常组、模型组、左归丸组大鼠MSC在成骨细胞分化过程中碱性磷酸酶(ALP)活性的表达及ALP染色阳性细胞率，比较

4、各组大鼠MSC的成骨细胞分化能力。5、观察正常组、模型组、左归丸组大鼠MSC在成脂细胞分化过程中甘油三酯(TG)的表达及油红0染色阳性细胞率，比较各组大鼠MSC的成脂细胞分化能力。结果：1、模型组P3代大鼠骨髓MSC在光镜下呈现衰老细胞形态学特征，左归丸组大鼠骨髓MSC的细胞形态与正常组相近。透射电镜观察显示，模型组大鼠P3代骨髓MSC细胞内结构改变呈现衰老特征，左归丸中剂量组大鼠的骨髓MSC电镜下的超微结构与正常组最相近。2、从各组大鼠P3、P5代MSC生长曲线图可发现，模型组MSCOD值明显低于正常组、左归丸组MSCOD值明显高于模型组(必0．05)。1

5、3一半乳糖苷酶衰老细胞染色结果显示，模型组衰老细胞阳性率明显高于正常组(K0．05)，左归丸可显著降低衰老细胞的阳性率(尸锄05)。3、碱性磷酸酶染色，模型组MSC染色阳性率明显低于正常组，左归丸组MSC染色阳性率明显高于模型组(尸<现05)。成骨诱导14d模型组MSCALP活性值明显低于正常组、左归丸组MSCALP活性明显高于模型组(尸<现彻。4、油红0染色，模型组MSC染色阳性率明显高于正常组，左归丸组MsC染色阳性率明显低于模型组(尸<现彻。成脂诱导7d模型组MSCTG表达量明显高于正常组、左归丸组MSCTG表达量明显低于模型组(尸<现∞。结论：1、所

6、培养的大鼠干细胞在细胞形态上具备MSC特征。衰老大鼠MSC的细胞形态各方面表现有明显改变。左归丸能改善衰老细胞的形态学变化。2、衰老大鼠MSC增殖能力减弱，左归丸能改善衰老大鼠MSC增殖能力。3、衰老大鼠MSC骨向分化能力降低，脂向分化能力增强。左归丸水煎液一定浓度时可促进衰老大鼠MSC向成骨细胞分化，同时可抑制其向成脂细胞分化。关键词：衰老；左归丸；间充质干细胞：增殖；分化IIEffectsofZuoguiPiIonMSCProIiferation，OsteogeniCDifferentiationandAdipogeniCDifferentiationo

7、fAgingRatsSpeciaIty：ThebasiCtheoryofTraditionaIChineseMediciReAuthor：ZhanFeiSupervisor：Associateprofessor：ZhangJinAbstractResearchpurposeThecurrentstudyinvestigatedtheeffectsofZuoguipill，whichisarepresentiveprescriptiontoinvigoratekidneyandnourishessence，onagingrat’Sbonemarrowmesen

8、chymalstemcells(MSC)pr01if