不同表面处理方法对牙本质脱矿和再矿化影响的afm研究

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1、华中科技大学硕士学位论文启动羟磷灰石形成,促进牙本质的矿化过程。近年来国际上对DPP在牙本质矿化中的生物学作用的研究取得了重要进展,可概括为四个方面:①矿化早期,磷蛋白有诱导晶体成核的作用,但对其浓度需求非常低,时间非常短;②矿化中期,磷蛋白附着在已经成核的结晶表面,控制矿物质生长速率、方向以及矿物质的结构;③矿化成熟阶段,在金属酶12的作用下,附着在初步矿化的牙本质表面的DPP解吸附、降解,降解后的磷酸根离子增加了局部的矿物质的饱和度,参与继续矿化过程;④牙本质矿化成熟后,又有新的蛋白附着在成

2、熟晶体表面,矿化活动停止。在体内,磷蛋白通过吸附、解吸附、降解等活动调控牙本质的矿化。所有上述活动均为基因调控,按照固有的空间和时间表达。根据研究,我们可以大胆猜想除外无机物本身的促进矿化作用,生物体可通过调节DPP中两种不同的成分在不同时空的成分比例不同来调节对矿化的具体作用。人体钙化组织合成的形态,包括碳酰羟磷灰石晶体的大小、形态、方向和位置是[14]通过胶原基质和非胶原蛋白的相互作用调控的。关于胶原蛋白矿化作用的研究,以经典途径——离子介导晶体生长为基础,一直集中在拟生态大分子对磷灰石晶体

3、成核[15,16]和生长的调控上。目前,关于磷酸钙调控磷灰石晶体生长的研究已经取得了很大[8]的成功,但关于胶原基质调控磷灰石的研究还是有所限制的。矿化的前期阶段是和[17,18]天然的矿化过程相关的。随着纳米技术的广泛应用,可以通过酸性大分子减少非[19]定形晶体的形成和附着。近来,生物矿化过程中,颗粒介导的非经典结晶途径已经[20]得到认可。在磷酸盐和钙离子中,这种途径不需要依赖离子容度积,而且对PH值和渗透压的没有太大相关性。更利于磷灰石晶体的形成。无机晶体核可以通过其自组装和晶体的调整来

4、实现,或许可以作为无机物的桥体,从而作为中间媒介物来调控单个晶体的形成。根据以往研究,牙釉质缺损的再矿化已经得到证实,但关于牙本质是否有再矿化[21-23]的能力尚存在一些争议。矿化牙本质中磷灰石的相位是按照管间纤维的结构和布[24]局进行分类的——包括三部分:牙本质小管,管间纤维和管周纤维。显微放射自显影术可以鉴定再矿化是否成功的理论已得到否定,因为在高度矿化的基质上形成的钙[25]磷矿化小结是很难观察到的,而且也不能把它当作真正的再矿化。有研究应用磷蛋3华中科技大学硕士学位论文白的同形物——

5、酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙(CPP-ACP)和纳米活性玻璃的混合物来促进牙本质的再矿化,但是通过拟生态途径,关于该同形物是否可以促进牙本质胶原[26]基质的再矿化,还没有相关的报道。此外,牙本质胶原纤维是否能够促进溶液中钙磷灰石表面磷灰石晶体的生长也需要进一步的研究。牙本质中的非胶原蛋白,比如I型胶原蛋白,门冬氨酸和聚丙烯酸可以作为它们[27][28]的同型物。来稳定和控制钙碳复合物和钙磷复合物中非晶像的量纲。另有文献报[29]道,再矿化液可以促进牙体硬组织的再矿化。其钙磷比约为0.175。本项

6、研究中,采用矿化液对牙本质的进行再矿化,应用原子力显微镜观察再矿化前后牙本质表面形貌和其粗糙度的不同变化。本研究分为两部分:(1)采用原子力显微镜(AFM),对经过不同表面处理后的牙本质表面形貌和粗糙度进行测量,以探讨这些表面处理方式对牙本质表面的影响。(2)采用原子力显微镜对比观察不同处理方法对牙本质再矿化前后表面粗糙度及其晶体生长的影响,探讨牙本质表面处理对再矿化的影响。4华中科技大学硕士学位论文1试验一:不同表面处理方法对牙本质表面形貌及粗糙度影响的AFM研究1.1材料和方法1.1.1牙本

7、质表面的形成选取36个因正畸拔除的无龋坏、无牙周病的正常前磨牙,用Isomet慢速锯流水条件下垂直于牙体长轴完全去除牙合面牙釉质,暴露表层牙本质,然后用240目、600目、1000目和1200目碳化硅水砂纸依次打磨牙本质表面,采用齿科用橡皮抛光杯加抛光膏抛光样本表面,将样本制备成5mm×4mm×2mm圆盘状,超声波清洗机(ULTRAsonik,Germany)在38KHz,100W条件下清洗15min,三次,以去除表面因打磨产生的碎屑。1.1.2样品分组36个样随机分为ABC三组,A组为对照组,

8、表面未进行进一步处理;B组为磷酸酸蚀组,样品采用37%磷酸(武汉弘基齿科器材有限公司)处理40s后超纯水漂洗三次;C组为磷酸/次氯酸钠处理组,处理过程为37%磷酸处理40s,然后10%次氯酸钠(天津市德恩化学试剂有限公司)处理200s,超纯水漂洗三次。样品处理后注意不要污染需要观察的表面,样品均采用滤纸吸干表面水分,置干燥器中干燥24h。1.1.3AFM观察样品粘台后,采用原子力显微镜(PicoscanTMMI,美国分子成象公司由武汉大学化学院提供)观察样品表面形貌,测试条件为横向分辨率<0.2

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