天府肉羊myoz2和myoz3基因的克隆及其在肌肉组织和部分器官中的表达分析

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationCloningandExpressionPatternsAnalysisofMYOZ2andMYOZ3GenesinTianfuGoatMuscleTissuesandOrgansByLuWan(AnimalGenetics，Breedingandreproductionl)DirectedbyProf．GangyiXuCollegeofAnimalScience&Technology,SichuanAgriculturalUniversit

2、yYa’an，Sichuan，ER．ChinaJune，2014万方数据本研究由lILlIlllltnlilLilWRIllIll哪J0121508国家现代肉羊产业技术体系”十二五¨项目(CARS一39)四川省“十二五"畜禽育种攻关项目(2011NZ0099—34)四川省青年基金项目(2013JQ0022)提供资助本研究在I四)ll农业大学畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室万方数据附件一论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或

3、集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：b翅眵jd够年6月71日，关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。囝本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本

4、授权。(请在以上口内划“√”)研究生签名：，『穆研究生签名：艘导师签名：乡纠渺五c嗨6月也日A够年6月皮日万方数据摘要肉质是畜禽生产的重要经济性状，其中一个重要的影响因素就是肌纤维。肌纤维类型与肉质的关系十分密切，其中慢肌纤维比例高的肌肉肉质更好，它是在很多基因控制下的产物。钙调磷酸酶(calcineurin，CaN)是一种常见的细胞信号分子，它参与的CaN／NFAT信号通路可以影响肌纤维类型，尤其是对促进慢肌纤维的转变有重要的作用。研究发现钙调磷酸酶肌小节结合蛋白基因家族(^硝DZ，)可以通过改calcineurin的活性来影响肌纤维类型的转变，从而影

5、响畜禽的肉质。为了探究天府肉羊MYOZ2基因和MYOZ3基因在肌纤维转化方面的作用，本试验利用反转录聚合酶链反应(reversetranscription．polymerasechainreaction，RT-PCR)、分子克隆、实时荧光定量(RT-qPCR)以及蛋白免疫印迹法(westernblotting)等实验技术对MYOZ2基因和MYOZ3基因进行了初步的研究，结果如下：1．本研究成功获得天府肉羊MYOZ2基因和MYOZ3基因的cDNA全部编码序列，MYOZ2基因序列长856bp，包含一个长度为795bp的ORF框，编码264个氨基酸；MYOZ3

6、基因序列长为832bp，含有一个大小为735bp的ORF框，编码244个氨基酸。将其提交至NCBI，获得两个基因的登录，分别是JX573191和KC537058。2．核酸序列和氨基酸序列比对发现MYOZ2基因较MYOZ3基因更加保守；系统进化分析发现，MYOZ2和MYOZ3与绵羊的亲缘关系最近，与爪蟾的亲缘关系最远。3．蛋白性质和结构分析发现MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白都含有若干个磷酸化位点，都是亲水蛋白，不含跨膜结构、信号肽序列以及糖基化位点，而且它们具有相同的Calsarcin保守结构域，二级结构上都包含G．螺旋、无规卷曲及延伸片断三种形式，且以前

7、两者为主。4．利用实时荧光定量PCR技术检测了MYOZ2基因和MYOZ3基因在300日龄8个不同组织中的相对表达量。结果显示?I棚pZ2基因在天府肉羊的腹直肌和心肌中有较高水平的表达，股二头肌和背最长肌的表达量较低，而肝脏、脾脏、肺和。肾脏的表达量极其微少：MYOZ3基因在腹直肌中表达量最高，股二头肌、肾脏、肺、背最长肌和脾脏中的表达量也较高，心肌和肝脏中几乎没有表达。在不同的日龄的4种不同肌肉组织中，MYOZ2基因和MYOZ3基因的表达量变化波动各不相同。5．使用蛋白免疫印迹方法检测天府肉羊MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白在300日龄8I万方数据个不同组

8、织中的表达情况。结果显示：MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白只在心肌、股二头肌、腹直