大鼠骨髓间充质干细胞在生物材料表面定向分化的研究

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1、ASTUDYONⅣDUCINGTHE脚BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSDIFFERENTIATIONDIRECTIONALLYONTHESURFACEOFBIOMATERIALSThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofScienceBYZHOUXin—hangSupervisedbyAssociateProf．MA0XiSoutheastUniversityMay2010东南大学学位论文独创性声明本人卢明所≯交的学f市论文

2、是我个人在导师指导卜．进jr的研究l：作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南人学或其它教育机构的学位或证lS而使川过的材料。与我一同‘I：作的同：占对本研究所做的任何贡献均已住论文巾作了明确的说明并表示了谢意。蹶生签名：l蛩垫塾日j{Ij：列!：【：丝东南大学学位论文使用授权声明东南人学、中困科学技术信息研究所、国家图lS馆有权保留本人所送交学位论文的复印fi，l：和电子文档，可以采川影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内

3、容相一致。除住保密j{jJ内的保密论文外，允许论文被奄阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形J弋刊登)论文的全部内容或

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6、、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权尔南人学研究生院办理。研究生签名：户A姜兰釜酶师签名：日期：塑∽r，名料表面定向分、纯化与鉴定emarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)的方法。对所培养的BMSCs进行表面标志鉴定并柃测它们向脂肪细胞分化的潜能。方法：从大鼠股骨下端抽耿骨髓，以贴擘培养法分离、纯化并扩增大鼠BMSCs；流式细胞仪(FCM)检测所培养的第二代细胞的细胞表

7、面抗原；用成脂诱导剂对第二代细胞进行诱导分化，分别在第7天、第14天和第21天对绣导后细胞进行油红O染色，观察胞浆内脂滴出现情况。结果：所培养细胞为成纤维细胞样，原代细胞呈集落状生长；第二二代细胞的细胞表而抗原CD29和CD90为阳性，造衄细胞潜系标志CD45为阴性；在诱导后第7天、第14灭和第21天，镜下可见分别约有7％、35％和65％的细胞内积聚了可被油窒[0染液着色的脂滴，证实这些细胞发生了成脂分化。结论：本研究成功地在体外分离、纯化和扩增了人鼠BMSCs；这些扩增后的第二代细胞表达BMSCs表面标志，具有良好的增贿及m脂肪细胞分化的

8、潜能。关键词：大鼠；骨髓问充质。l：细胞；分离；细胞表面抗原；成脂分化第二章具有微米级化学图案的生物材料聚乙二醇和聚磺酸基甜菜碱一异丁烯酸的生物相容性鉴定目的：在生物材料表面构建微米级的化学图案，将BMSCs接种其上，观察BMSCs在生物材料表面的生长情况，进行￡扛物柏容性鉴定。方法：消化第一代BMSCs，以2．0×lO7／L的密度将细胞接种于具有微米级化学图案的聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)和聚磺酸琏甜菜碱一异丁烯酸(sulfobetainemethacrylate，SBMA)'1-物材料表面，继续培养一周先右时

9、f11J，取出卜．述细胞进行吖啶橙(acridineorange，AO)染色，观察细胞l中义猢萤生长情况。结果：接种有BMSCs的PEG材料膜和SBMA材料膜，经过吖啶橙染色后，可以看出BMSCs在两种材料表面均生长良好，而且有图案处，E长密度明显高于无图案处。结论：具有微米级化学图案的PEG和SBMA有良好的生物棚容性，为下一步在这两种生物材料表面进行BMSCs的定向分化研究打下了良好的琏础。关键词：骨髓问充质干细胞；聚7,2-_醇；聚磺酸基甜菜碱．异丁烯酸；微米级化学图案；生物相容性第三章大鼠骨髓间充质干细胞在生物材料表面定向分化为脂肪

10、细胞目的：将BMSCs接种到具有微米级化学图案的生物材料表而，结合化学物质诱导，找到合适的分化条件，实现BMSCs在较短的时

11、1jJ内高效分化为脂肪细胞。方法：通过贴擘培养法体外分离纯化大鼠BMSCs，取第一二代BMSCs接种到普通玻片表而和具有微米级化学图案的生物材料PEG和SBMA表面，并使用成脂诱导剂进行诱导分化，对诱导分化的细胞分别在第5天、第10天和第15天进行油红O染色，观察比较在不同材料表面的诱导分化效率。结果：BMSCs成脂诱导分化后，经油红O染色，可见诱导组细胞胞浆内出现大量红染脂滴，诱导分化效率随培养时问的延长明显增高；

12、在PEG和SBMA两种生物材料表而的诱导分化效率没有明显筹别，并且在生物材料表面诱导比在普通玻片J：诱导分化效率明娃增高。结论：成脂涛导剂和生物材料微米级化学图案的共同作用能够加