大黄蒽醌类化合物对t淋巴细胞增殖的作用和机制的研究

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1、南开大学硕士学位论文大黄蒽醌类化合物对T淋巴细胞增殖的作用和机制的研究姓名：李臣宇申请学位级别：硕士专业：生物物理学指导教师：李俊英20070501摘要T淋巴细胞的活化和增殖是机体重要的免疫反应，植物血凝素(PHA)作为有丝分裂原可刺激T细胞转化为淋巴母细胞并进行增殖。淋巴细胞胞内钙离子浓度的变化在调控细胞的活化、增殖以及功能中起重要作用。本文采用MTT法和单细胞钙荧光成像技术，研究了中药大黄的有效成分芦荟大黄素、大黄酸和大黄素对PBA引起的大鼠T淋巴细胞增殖的影响以及与细胞内钙离子浓度([Ca2+]。)变化的关系。通过M1vr比色法实验证明：芦荟大黄素对PBA引起的

2、大鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用，1，10，100Ⅲ浓度的芦荟大黄素抑制率分别为30％，33％和38％；1，10，100pM时大黄酸的抑制效果分别为22％，23％和25％；大黄素抑制率在1，10，100州浓度时分别为30％，31％和31％。钙荧光成像技术结果表明：PHA使淋巴细胞[ca2+]。由基础值迅速升高，并持续维持高[C矿]，水平，形成平台。P}lA诱发的细胞[Ca”]。升高包括胞内Ca2+释放和胞#l-Ca’内流两个过程，而持续性高[Ca2．]。平台的维持主要与Ca2"内流有关。芦荟大黄素对PBA引起的淋巴细胞[Ca2+]。升高有明显的抑制作用，ll-tM浓度芦

3、荟大黄素存在条件下，PHA引起的[Ca2+]，升高的峰值被抑制，并且[C矿]；快速升高达到峰值后迅速下降，恢复到基础值水平，不能形成持续性高[C矿]。平台，10M浓度芦荟大黄素作用后的T细胞，PHA刺激后，钙信号被完全抑制，表明芦荟大黄素对胞外Ca”内流有强抑制作用。1，IOpM浓度的大黄酸作用后的T细胞，受PHA刺激，在胞外无钙条件下，钙信号被完全抑制，说明两种浓度大黄酸对T细胞胞内钙释放均有很强的抑制作用；在胞外有钙条件下，[Ca2+]。的快速升高均被抑制，[Ca2+]，的升高呈现缓慢坡度上升的趋势。浓度为l，10H大黄素作用后的T淋巴细胞，受PBA刺激后，在胞外

4、无钙的条件下，钙信号被完全抑制，说明大黄素对PHA引起的T细胞胞内钙释放具有完全的抑制作用；在胞外有钙的条件下，T细胞[Ca”]。的迅速升高被抑制，只表现为缓慢的上升。结论：芦荟大黄素、大黄酸大黄素和对PHA引起的T淋巴细胞增殖有抑制作用，且芦荟大黄素的抑制作用强于大黄素和大黄酸；三种药物对PHA引起的T细胞内Ca2+浓度升高有抑制作用，但抑制[Ca2+]，升高的途径有差别。关键词：T淋巴细胞PHA增殖胞内自由钙离子浓度芦荟大黄素大黄酸大黄素AbstractTheactivationandproliferationoftheTlymphocyteisanimporta

5、ntimmuneresponse．Cytosolicfreecalciumconcentration(【ca2+】I)playimportantrolesinTcellactivationandproliferation．Inthisstudy，WeinvestigatethecharacteristicsandmechanismsofAloe-emodin，RheinandEmodinonphytohemagglutinin(PHA)-inducedTcellproliferationand【Ca：+】IdynamicsbyusingM'lff(3一【4，5-dim

6、ethylthiazol一2·y1]·2，5-diphenyltetrazoliumbromide)assayand【Ca：qlimageanalysissystem．TheresultsofMTTassayshowsthatAloc-emodin，RheinandEmodininhibitPHA—inducedTcellproliferation．Theinhibitionratesof1，10，100laMAloe·emodin玳30％，33％and38％：respectively,thatforl，10，1001aMRheinare22％，23％and25％an

7、d1，10，100IxMEmodinc粕inhibits30％，31％and31％ofTcellproliferationinducedbyPHA．ThedataofCa：+imageshowed,ActivationofTlymphocyteswithPHAresultsinabiphasicelevationof【ca：qlduetoca，releasefrominternalstoicsfollowedbyasustainedCa2+influxacrosstheplasmamembrane．Thefirstelevationisveryrap