hbmp4和hbmp7在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究

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1、福建师范大学硕士学位论文hBMP4和hBMP7在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究姓名：邓春梅申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：张彦定201106中文摘要骨形态发生蛋白(BoneMorphogeneticProteins，BMPs)是一类属于TGF-p超家族的蛋白质生长因子，主要活性形式是糖基化的同源或者异源二聚体。它能够使未分化的间充质细胞定向分化为成骨细胞并具有形成骨组织的能力。众多的BMPs都具有诱骨活性，其中以BMP4和BMP7的诱骨活性最强。后来的研究发现BMPs不仅具有骨诱导活性，还能够调节细胞的生长、增殖和分化，同时BMPs对脑、肾脏、肝脏、

2、泌尿系统等组织器官的决定和分化起重要作用。在国内学者们主要利用大肠杆菌或者毕赤酵母表达系统来表达rhBMPs，这些表达系统具有操作简单、产量高成本低等优点，但是表达产物的结构不同于天然蛋白。所以本实验尝试利用中国仓鼠卵巢(Chinesehamsterovary，CHO)细胞表达hBMP4和hBMP7。主要研究工作包括：@hBMP4和hBMP7重组表达载体的构建，然后电转染CHO／DG44细胞株，基因组PCR和RT-PCR鉴定基因的整合和转录。②表达产物经过初步纯化WESTERN．BLOT分析表明rhBMP4存在二聚体和单体。③氨甲喋呤逐步加压扩增目的基因，rh

3、BMP4表达量提高了2倍，测得表达量为330ng／ml。④有限稀释法筛选高表达细胞株，rhBMP4表达量达到了583ng／ml。⑤通过碱性磷酸酶活性测定实验证明纯化后的rhBMP4具有生物活性。@DOT-BLOT和ELISA分析表明hBMP7重组表达质粒电转染CHO／DG44细胞后能够表达rhBMP7。关键词：rhBMP4；rhBMP7；CHO细胞；外源蛋白表达福建师范大学邓春梅硕士学位论文nAbstractBoneMorphogeneticProteinsaregrowthfactors，membersofthetransforminggrowthfacto

4、rpsuperfarnily,whichmainactiveformarehomologousorglycosylatedhcterodimer．Theycarlmakeundifferentiatedmesenchymalcellsdifferentiateintoosteoblastsandformbonetissue．ManyBMPshaveosteoinductiveactivity,BMP4andBMP7havethestrongestinducedactivityamongthem．LaterresearchfoundthatBMPsnotonly

5、haveosteoinductiveactivity,butalsoCanregulatethecellgrowth，proliferationanddifferentiation．Atthesametime，BMPsplayanimportantroleindeterminationanddifferentiationofvarioustissuesandorgans，forexamplethebrain,kidney,liver,urinarysystemandSOon．ScholarsinthecountrymainlyuseE．coliorpichia

6、pastorisexpressrhBMPs．Theseexpressionsystemcostislowandoperationisverysimple，butthestructureoftheproductisdifferentfromthenaturalprotein．Sointhisexperiment，WetrytouseChinesehamsterovarycellsexpresshBMP4andhBMP7．Ourworkinclude：①FirstlyconstructthehBMP4andhBMP7recombinantexpressionvec

7、tor,andthenelectrictransfectedintotheCHO／DG44cells．FinallyidentifythegeneintegrationandtranscriptionbygenomicPCRandRT-PCR．②Afterapreliminarypurificationoftheexpressedproduct，WESTERN．BLOTanalysisshowedthattheexistenceofrhBMP4dimerandmonomer．③TheexpressionlevelofrhBMP4increased2-foldb

8、ymethotrexatepressu