ngal在胃癌中的调控机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文NGAL在胃癌中的调控机制研究姓名：汪胜利申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：陶厚权2012-05-21温州医学院硕士学位论文NGAL在胃癌中的调控机制研究中文摘要目的构建NGAL真核表达载体pcDNA3．I+／NGAL+及NGAL反义表达载体pcDNA3．I+／NGAL一，转染胃癌SGC一7901细胞，体外实验观察细胞内NGAL表达水平改变对SGC一7901细胞增殖及侵袭转移能力的影响，进一步阐明NGAL在胃癌发生发展中的作用。方法1、提取正常胃粘膜组织的RNA，逆转录合成

2、cDNA，以此cDNA为PCR模板扩增出NGAL基因的ORF序列；PCR产物经酶切、连接反应插入DcDNA3．1+表达载体，从而构建NGAL真核表达载体pcDNA3．I+／NGAL+及NGAL反义表达载体pcDNA3．I+／NGAL一。2、重组质粒DNA转染SGC-7901胃癌细胞，采用荧光定量PCR检测细胞中NGAL的相对表达水平，选取NGAL表达水平最高的SGC一7901细胞克隆(SGC一7901／NGAL+)和NGAL表达水平最低的SGC-7901细胞克隆(SGC一7901／NGAL一)，再经M

3、TT试验、迁移试验及侵袭试验观察NGAL基因对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果1、成功构建了NGAL真核表达载体pcDNA3．I+／NGAL+及NGAL反义表达载体pcDNA3．I+／NGAL一。2、通过重组质粒DNA转染、荧光定量PCR检测，成功获得NGAL表达水平最高的SGC一7901／NGAL+细胞及表达水平最低的SGC一7901／NGAL一细胞。MTT实验显示，72h后，SGC-7901／NGAL一细胞的相对增殖率为SGC一7901／NGAL+的1．33倍。迁移实验表明

4、，24小时后穿过膜的SGC一7901／NGAL一细胞数达到206．2±24．01个，而穿过膜的$GC一7901／NGAL+细胞仅143．2±25．2个，SGC一7901／NGAL一细胞的迁移活性为SGC-7901／NGAL+细胞的1．44倍。侵袭实验显示，48小时后穿过膜的SGC一7901／NGAL一细胞数达到52．4±15．6个，而穿过膜的SGC一7901／NGAL+仅29．2±9．1个，$GC-7901／NGAL一细胞的侵袭活性为SGC一790J／NGAL+细胞的1．79倍。结论体外实验初步证实N

5、GAL基因可抑制胃癌SGC一7901细胞的增殖、迁移及侵袭能力。关键词：NGAL；胃癌；增殖：侵袭；迁移温州医学院硕士学位论文StudyofRegulationMechanismofNGALinGastricCancerABSTRACTPurposeToconstructNGALeukaryoticexpressionvectorpcDNA3．1+／NGAL+andNGALantisenseexpressionvectorpcDNA3．1+／NGAL一，andstudytheeffectofNGALo

6、ncellproliferation，invasionandmetastasisofSGC一7901invitro．Methods1，TotalRNAwasextractedfromthenormalgastricmucosaltissue，andconvertedintoeDNAbyRTreaction．NGALORFwasamplifyedbyPCRusingeDNAastemplate．ThePCRproductwasthencutbyrestrictionenzyme，andclonedint

7、opcDNA3．1+vectorinsenceorantisencetoconstructNGALexpressionvectorpeDNA3．1+／NGAL+andNGALantisenseexpressionvectorpcDNA3．1+／NGAL一．2TheRecombinantplasmidDNAweretransfectedintogastriccancercellsSGC一7901．ThenthemRNAlevelofNGALinSGC-7901weredeterminedbySYBRGr

8、eenbasedquantitativePCR．andSGC-7901cellcloneswiththehighestNGALlevel(SGC-7901／NGAL+)orlowestNGALlevel(SGC一7901／NGAL一)werechoosed．Then，MTTassay,invitrocellmigrationandinvasionassayswereperformedtoevaluatetheeffectofNGALoncellproli