埋植mlt银黑狐的卵巢组织学及卵母细胞体外成熟的研究

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1、万方数据HistologicalstudyonovaryofMLTHiddeninVulpesFulvaanditsoocytesinvitromaturationThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWangXiao(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：MaZefangCuiKai

2、Qingdao．China万方数据独创性声明JlllJIJllIIIJJl}IIJJJIIJJIllIJIJIIIUIlllllJIJJllJY2663173本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：≥现时间：弘f叩年6月矽自关于论文使用授权的说明

3、本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：导师签名：泄豸啐易时间：劬f≯年厂月珍自时间：砂／中年／月哆名万方数据青岛农业，J、学硕士学融沦文摘要埋植MLT银黑狐的卵巢组织学及卵母细胞体外成熟的研究成熟的研冤摘要为了探究休情期埋植褪黑激素(Melatonin，MLT)银黑狐卵

4、巢能否用于体外成熟(IVM)，进行了卵巢组织学和卵母细胞IVM的研究，为体外受精和胚胎移植等生物工程奠定基础，并为卵巢获取开辟了另一条新途径。试验于2012年11月中旬，采集30只8月龄，埋植MLT的健康雌性银黑狐卵巢共计60枚。随机选取10只银黑狐的左侧10枚卵巢，用于观察卵泡以及卵母细胞显微结构，并用目镜测微尺测量各级卵泡和卵母细胞的直径，平均每个卵巢观察并测量原始卵泡6～8个、初级卵泡5～7个、次级卵泡6～8个、三级卵泡5～7个、成熟卵泡l～3个：右侧10枚卵巢，用于观察各级卵泡发育过程中卵母细胞超显微结构，平均每个卵

5、巢观察原始卵泡6～7个、初级卵泡4～6个、次级卵泡3～4个、三级卵泡2～3个、成熟卵泡I～2个；其余40枚卵巢用作卵母细胞体外培养，以TCMl99作为IVM基础培养液，添加FSH、LH、GnRH、HCG、PMSG的不同激素组合以及37℃、39℃两种不同培养温度、不同卵泡直径，探究不同因素对银黑狐卵母细胞体外成熟率的影响。研究结果表明：1．埋植MLT银黑狐卵巢显微结构分为被膜、皮质和髓质三部分，被膜由外层生殖上皮和内层白膜两部分组成，在皮质分布着大量的生殖腺和不同发育阶段的卵泡，髓质由疏松结缔组织构成，含有少量平滑肌、神经和丰

6、富的血管、淋巴管。卵泡和卵母细胞的平均直径范围分别为37．25"--一566．77岬和31．13～112．05岬，透明带平均直径范围是3．34"-'8．24岬。原始卵泡时，未见透明带结构；初级卵泡时，颗粒细胞与卵母细胞之前出现不完整的透明带：次级卵泡颗粒细胞之间逐渐出现一些大小不等的腔隙，未形成完整的卵泡腔，透明带增厚并趋于完整：三级卵泡颗粒细胞间的腔隙逐渐汇成卵泡腔，腔内充满卵泡液：成熟卵泡时，透明带厚度最大，颗粒细胞具有踢显的放射冠结构。2．埋植MLT银黑狐超微结构可见原始卵泡卵母细胞胞质中分布有丰富的线粒体，可见大量不

7、典型的高尔基复合体和或大或小深染的不均匀嗜锇颗粒：初级卵泡阶段．线粒体数量增加，高尔基体数量减少，脂滴直径变大，部分脂滴有1～3层滑面内质网围绕，少量皮质颗粒出现，开始形成不完整的透明带，且有短小的微绒毛斜伸入透明带内：次级卵泡阶段，内质网形成短的扁囊状结构，皮质颗粒数量增多。三级卵泡多层颗粒细胞间隙融合成卵泡腔，透明带内有长而多的微绒毛插入，偶尔可见到一个卵泡内有两个卵母细胞的现象。成熟卵泡的颗粒细胞进入卵泡腔，形成卵丘，且卵泡腔内充满卵泡液，万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要透明带内部分微绒毛由竖直变为倒伏，高尔基体完

8、全消失，滑面内质网形成长的类似于环形片层结构。3．卵母细胞在添加GnRH和添加FSH+LH的培养液中，卵丘扩散率(分别为63。25％，66．86％)、极体排出率(分别为3．72％。4．60％)均差异不显著(P>0．05)；添加HCG、PMSG以及HCG+PMSG三种激素的三个组卵母细胞的卵