不同成熟时间及去核条件对山羊体细胞核移植效果的影响

《不同成熟时间及去核条件对山羊体细胞核移植效果的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、977751分类号：§墼2：iiQ!i2：8UDC：§Z§密级：垒Ⅱ学校代码：10712研究生学号：S03291⑧西北农林讲杖大学2006届攻读硕士学位研究生学位(毕业)论文不同成熟时间及去核条件对山羊体细胞核移植效果的影响学科专业研究方向研究生指导教师完成时间蕉直生塑堂——嗑塾垫塑题脸王程一直童功鍪逦麴握!!Q曼生曼旦中幽陂凸杨凌不同成熟时间及去核条件对山羊体细胞核移植效果的影响摘要本实验通过改变以下试验条件：卵母细胞体外成熟时间的不同、卵母细胞去核时操作液成分的不同，来研究其对山羊核移植效率的影响，希

2、冀寻找一个有效的核移植方案。l、将山羊卵母细胞经过不同的体外成熟时间后：18h、22h、26h，比较其成熟率发现，经三种成熟时间的卵母细胞成熟率差异不显著。将这三种情况下的卵母细胞去核后，比较其去核率时发现，随卵母细胞成熟时问的延长去核率下降(87．1％，84．4％，76．5％)。但是对核移植胚的体外发育情况进行进一步研究发现，18h时的卵裂率(71．8％)明显低于22h和26h(81．1％，82．5％)：22h时的囊胚率(19．6％)高于18h和26h时的囊胚率(12．5％，15．7％)。所以，卵母细胞

3、体外成熟时间以22h左右为宜。2、本研究比较了判断山羊卵母细胞去核效果的指标：将具有第一极体的卵母细胞放入含细胞松弛素B(cytochalasin—B，CCB)浓度分别为5mg／L、7．5mg／L、10IT]【g／L、15mg／L的操作液中盲吸去核，经荧光染色后检测去核率，再构建重组胚观察重组胚的发育情况；在含7．5mg／LCCB的操作液中分别再加入质量浓度为2％、2．5％、3％的蔗糖进行去核，再用相同方法确定去核率，再构建重组胚观察重组胚情况。结果：CCB浓度为7．5mg／L时，去核成功率(84．4％)

4、明显高于对照组(70．7％)，也高于其他各组；平均操作时间随CCB浓度的升高而降低；含CCB浓度为7．5mg／L与5mg／L的操作液去核卵母细胞所构建的重组胚卵裂率(81．1％、82．496)显著高于对照组和15mg／L的卵裂率(69．8％、71．8％)：含CCB浓度为7．5mg／L与5mg／L的操作液去核卵母细胞所构建的重组胚囊胚率(19．6％、18．8％)显著高于对照组的囊胚率(9．5％)。蔗糖质量浓度为2．5％时的去核成功率(91．4％)明显高于对照组(84．4％)；平均操作时间随蔗糖质量浓度的升高

5、而降低。结论：去核时在如下条件下，可以取得最佳去核效率：(1)去核时操作液中CCB浓度7．5mg／L：(2)操作液中蔗糖质量浓度为2．5％。关键词：细胞松弛素；蔗糖：成熟时间：山羊；核移植THEEFFECTOFMATURETIMEANDENUCLEATINGCONDITIONoNGOATSoMATICNUCLEARTRANSFERABSTRACTInordertofindaneffectivenucleartransferprogram，thisthesisinvestigatedthreefactors

6、affectingtheefficiencyofsomaticnucleartransferongoats：theinvivomaturetimeofOOCytes，thecomponentofoperationliquidforoocyctesenucleatingandtheparthenoactivationmodeofoocytes．1．Goatoocytesdifferentlymaturedinvivo18h，22hand26handthematuringrateswerenotremarka

7、ble．Thenthese3kindsofoocyteswereenucleated，theresultshowedenucleatingratesdeclinedasmaturingtimeprolonged．Thesewere87．1％．84．4％and76．5％，respectively．Afternucleartransferring，weobservedthecleavageratesandtheblastularatesofnuclear-transferembryos．Thecleavage

8、rateofembryoscorresponding18h(71．8％)Wasobviouslylowerthanones22h(81．1％)and26h(82．5％)．Theblastocystratecorresponding22h(19．6％)Wasremarkablehigherthan18h(12．5％)and26h(15．7％)．Theconclusionisthatthesuitabletimeofoocytem