临床pcr实验室的设计与质量管理体系的建立李金明

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1、.....临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立卫生部临床检验中心李金明核酸（DNA和RNA）是生命现象的基础。小到病毒、细菌等微生物，大到动植物和人类，都无一例外。因为主导生命活动的受体、细胞因子、酶、激素等均不过是核酸发挥功能作用的表型，均由核酸决定，在核苷酸序列上哪怕是单个碱基的变异，都会引起表型的完全改变，并进而影响生命功能的发挥，导致疾病的发生。因此，在核酸或称为基因水平上检测，对临床疾病本质的揭示就要更深一步。也正因为核酸是生物体生命活动之源，对于感染性病原体的检测，从核酸着手，最能反映病原体在机体内的出现和消长。自从美国Cetus公司Mullis博士在1983年发明聚合酶链反

2、应（PCR）这种核酸扩增技术以来，由于其极高的检测灵敏度和特异性，因而在临床感染性疾病、遗传病、肿瘤等的诊断和疗效观察上得到了广泛的应用，在器官移植的基因配型上也是难以替代的技术。其应用大大提高了上述疾病诊断的准确性和快速性。但临床PCR检验必须按规范要求进行，并有严格的实验室质量管理，否则，因其极高的检测灵敏度，实验室稍有以前扩增产物的污染，或在标本核酸提取过程中标本间的交叉污染，均可导致假阳性结果的出现。同时，也会因为试剂和实验消耗品的质量不过关、仪器设备的维护校准不到位，或操作的不规范等，也很容易出现假阴性结果。第一节临床PCR实验室的分区规划设计如何规划设计一个合格的实验室是每一个临床

3、PCR实验室首先要遇到的问题，因为一个实验室一旦经过设计并完成装修，如不符合要求，则会出现很大的麻烦，甚至不得不拆了重来。那么怎样才能设计一个合格的实验室呢？简单地说，就是十六个字，“各区独立、注意风向、因地制宜、方便工作”。同时要注意临床标本的接收问题。对于临床PCR实验室的分区及其设备配置，卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）中作了明确规定，并且卫生临床检验中心发出的配套文件《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字[2002]8号）又对各区的功能及注意事项作了阐述。但具体到某一个实验室，如何根据其实际情况和环境设计一个符合要求、可保证检测质量及方

4、便工作的PCR实验室，实验室技术人员仍时常感到心里没底，因此，本章拟对临床PCR实验室分区规划设计和工作流程的一般原则再作一些具体的阐述，并尽可能举出一些实例加以说明。word格式.整理版.....一、临床标本的接收对于诸如血清（浆）、分泌物、痰液、尿液、脑脊液等临床标本的接收、分离血清、编号乃至保存，一个临床PCR实验室究竟应在何处进行较为合适？这是一个非常实际的问题，也是作为一个临床实验室首先要解决的问题，经常有同道提出来。要回答这个问题，首先让我们来看一下临床标本送到实验室以后我们所要做的是什么？一般来说，当临床标本如血液、分泌物和其他体液等送到实验室后，按照临床基因扩增检验质量保证对标

5、本采集、运送和保存的要求，对标本接收编号后，即应尽快对其分离血清（浆）或预处理后保存待测，并且根据对临床标本较长期保存的要求，最好是在分离血清（浆）时，分出两管来，一管用于测定，一管长期保存备查。因此，最好是在PCR实验室的四个独立测定区域之外的地方接收临床标本，有一台分离血清（浆）用离心机、一台生物安全柜、一台冰箱、加样器及相应一次性经高压处理的消耗品如带滤芯吸头、标本接收编号记录本以及记号笔等即可。如果不在标本接收区分离血清（浆）标本，只是简单的接收，则就不需要分离血清（浆）用离心机、生物安全柜、加样器及其消耗品。通常，有许多实验室将临床标本的接收处放在标本制备区，而一个医院临床标本的运送

6、至实验室往往不会在同一个时间，标本来了就应该进行接收登记、交接签字和对标本进行编号，并尽快分离血清（浆）或相应处理，因此，如将标本接收处放在标本制备区，就会因为临床标本的接收而使实验室工作人员频繁出入标本制备区，从而增加实验室污染的机会。而且由于条件所限，有相当一部分临床基因扩增检验实验室的设置为一个区套一个区的模式，要进入标本制备区就必须先进入试剂准备区，最后还只能经扩增区从产物分析区出实验室。这种情况下就必须将临床标本的接收处放在四个区之外的地方，可以与其它临床标本的接收、编号和保存处放在一起。如在标本接收处对血液标本进行血清（浆）分离，则要注意防污染，所用器具符合要求并在生物安全柜中进行

7、。所接收的用于PCR检验的标本应收集在原始密闭的一次性无菌容器中，不能接收从其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本，因其有较大的发生标本间污染的可能性。接收临床标本时，操作者应穿工作服及带手套，每份标本应放在适当的架子中，防止泄漏，并给出一个唯一性编号。标本的保存按要求进行，冰冻通常在－20℃～－70℃条件下，避免反复冻融。在核酸提取时，由PCR实验室人员将标本带入至标本制备区。二、临床PCR实验