临床pcr检验的室内质控2017版-李金明

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1、临床PCR检验的室内质控方法卫生部临床检验中心李金明2017年10月存在的问题概念不清不知道具体怎么做不会写室内质控的SOP不知道如何选择室内质控物不会分析室内质控的结果室内质控SOP存在的问题责任人不清。质控物的来源及浓度不清或不全，并且通常没有说明阴性质控物的来源。有些是自制，但制备方法不规范，没有任何的质量检验，定量结果没有溯源性。没有明确所选用的质控方法。对前20次的测定的室内质控没有解决方法。没有明确的失控判断标准，只是做了一些失控的含糊叙述。并且一般都没有阴性失控的判断方法。没有失控后的分析及处理措施。室内质量控制（I

2、nternalQualityControl,IQC)的概念由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。可概括为:(1)执行者：实验室技术人员；(2)目的：监测实验室测定的重复性；(3)功能：决定了当批测定的有效性，报告可否发出。是对实验室测定的即时性评价。室内质量控制（IQC）的基本内容主要包括三个方面：（1）测定前的质量控制；（2）统计学质量控制；（3）质量控制的评价。测

3、定前的质量控制实验室设施、仪器设备及管理理想的试剂和操作方法人员培训实验室设施、仪器设备及管理实验室空间及工作流程的设计实验室环境条件的控制：温湿度控制设备、稳压或不间断电源理想的PCR实验室设计A产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区理想的PCR实验室设计B临床PCR实验室设计的一般原则各区独立注意风向因地制宜方便工作“十六字口诀”产物分析区空气流向空气流向空气流向

4、空气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区传递窗传递窗传递窗临床PCR实验室质量管理的特点“无基因”概念实验室要有严格的人员进入限制和程序使用合格的试剂和消耗品PCR实验室“污染”的主要来源临床标本中存在的大量待测微生物科研中得到的质粒克隆以前分析研究的特定微生物大量存在于实验环境中的特定微生物以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验室最容易产生的将造成假阳性的“污染”。PCR实验室的重要防“污染”措施实验室的严格分区及工作程序的严格遵守化学方法：实验台面可使用10％的次氯酸钠（漂白剂）清洗；有些物品比如

5、放置扩增反应管的盘必须从污染区转回到清洁区时，在转回之前，应将其置于2％~10％的次氯酸钠溶液中过夜，并充分冲洗。紫外照射：实验台面、仪器设备、实验室空间UNG仪器设备及管理PCR仪、离心机、加样器、恒温设备等应建立技术档案，并定期维护;PCR仪、加样器、恒温设备应定期进行校准理想的试剂:试剂的质检核酸提取或标本处理方法的抗干扰能力（能否有效地去掉PCR抑制物）测定下限(Detectionlimit)（定性测定）测定准确性和线性范围批内变异和批间变异试剂批间的一致性有否污染其他：外包装、试剂的完整性、有效期、说明书等理想的操作方法

6、按照试剂盒说明书操作即可吗?操作中影响测定结果的关键环节写出具有可操作性的SOP人员培训培训所涉及的范围:仪器设备使用、维护和校准；试剂、方法原理；质量管理体系；相关法律法规、相关领域的新技术、新理念和新进展；实验操作技能等。如何培训：讲座、讨论、自学和参加培训班等。培训的评估：书面考试、实验考核、讨论心得、论文、综述等。统计质控方法质控物浓度的选择每次（批）测定质控物的数量及放置质控规则Levey-Jennings质控图方法“即刻法”质控方法“假阳性”的统计质控方法质控物浓度的选择定量测定：测定线性范围内的高、中、低三种浓度定性

7、测定：接近方法测定下限的浓度阴性质控物每次（批）测定质控物的数量及放置标本数量如小于30，弱阳性和阴性质控各1份，标本数量增加，质控物数量相应按比例增加均匀分散于临床标本中，与临床标本一同处理（核酸提取）扩增时的排列顺序，可排于标准品或校准品之后，临床样本之前。但在扩增仪中的位置，不应永久性的固定的在一个孔，而应在每次扩增检测时，进行相应的顺延，以使在一定的时间内，可以尽可能的监测每一个孔的扩增有效性。阴性质控样本的种类阴性原血清样本实验过程中带入的空管仅含扩增反应混合液的管阴性原血清样本的功能监测实验室的以前扩增产物的“污染”由

8、实验操作所致的标本间的交叉污染。具体地说，如强阳性标本气溶胶经加样器所致的污染、强阳性标本经操作者的手所致的污染、使用翻盖离心管核酸提取时在较高温孵育时盖子崩开等扩增反应试剂的污染。核酸提取过程中带入的空管监测核酸提取过程中的实验室“污染”的存在（