七鳃鳗l--clqdc--1的克隆表达及免疫学功能分析

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1、分类号：密级：学校代码：10165学号：201111194遣宰研耗大学硕士学位论文②七鳃鳗三．CJpC--的克隆表达及免疫学功能分析作者姓名：学科、专业：研究方向：导师姓名：刘阁细胞生物学细胞遗传学李庆伟教授2014年04月学位论文独创性声明㈣㈣㈣㈣m㈣l洲IY2612635本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：蓟盥学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、

2、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：壹!】』缉指导教师签名：刎◇'签名日期：函Ⅳ年厂月必日辽宁师范大学硕士学位论文摘要Clq蛋白家族由众多含Clq结构域的蛋白组成，从细菌到高等哺乳动物中都有分布。这类蛋白由一条信号肽、胶原样区和Clq球状结构域组成。Clq蛋白家族根据其结构特点，可分为三大类分子：Clq

3、、Clq．1ike和ghClq。因其典型结构Clq结构域能够识别和结合众多自身和非自身配体，这些蛋白参与一系列的免疫应答反应，例如，病原体识别、吞噬作用、补体系统激活和调节细胞迁移等。ClqDC蛋白作为近年来新发现的一类非常重要的模式识别受体，逐渐成为调节免疫应答的潜在药物开发的重要靶点。本论文通过5’和3t末端快速扩增实验，并对所得测序结果进行分析和拼接，成功得到七鳃鳗L—ClqDC-1的eDNA全长序列(1662bp)，其中5'-UTR107bp，Y-UTR844bp，开放阅读框71lbp，编码236个氨基酸。利用生物信息学的方法，对L—ClqDC-1编码氨基酸序列的理化性质、结构特征

4、及系统进化关系等进行预测和分析。进一步构建L．C1qDC．1．pColdI原核表达载体，并成功在表达菌RosettaBlue中进行表达，获得可溶性的七鳃鳗L．CNDC．1重组蛋白，经组氨酸亲和层析柱纯化，获得L．ClqDC．1重组蛋白纯品。以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰兔，制备兔抗七鳃鳗L．ClqDC．1多克隆抗体。流式细胞分选技术和激光共聚焦显微镜检测结果表明七鳃鳗免疫小体细胞能够表达L—C1qDC．1，并且L—C1qDC一1分子分布在免疫小体细胞的细胞质中。免疫共沉淀和Westernblot实验说明在七鳃鳗血清中，L．ClqDC．1和VLRB之间存在相互作用。激光共聚焦显微镜检测到当

5、用七鳃鳗血清杀伤肿瘤细胞时，L．ClqOC．1和VLRB在肿瘤细胞中发生共定位现象，并且定位在肿瘤细胞的细胞膜和细胞质中。综上所述，L．C1qDC．1可能参与由VLRB介导的适应性免疫反应，识别外来抗原，在七鳃鳗的免疫反应及免疫防御中发挥重要作用。关键词：七鳃鳗：免疫应答；CIqDC蛋白；系统进化七鳃鳗L-ClqDC-1的克隆表达及免疫学功能分析Cloning．一‘andImmunologicalFunction‘alysisofL．ClqDlonmgExDresslonandImmunologicalunctionAnaJySlS1C-1’．‘乙一fromLampetrajaponicu

6、mAbstractTheClqproteinfamilyconsistsofmanyproteinscontainingaClqdomain，whichexistswidelywithinorganismsfrombacteriatomammals．Thedomainorganizationoftheseproteinsmainlyincludesaleadingsignalpeptide，acollagen-likeregion，andaglobularClqdomain．Accordingtotheirstructuralcharacteristics，theClqproteinfam

7、ilycanbedividedintothreesubgroups：Clq，Clq-likeandghClq．Theyparticipateinaseriesofimmuneresponses，suchaspathogenrecognition，phagocytosis，activationofthecomplementsystem，andregulationofcellmigrationdependingonversa