七鳃鳗(lampetra japonica)cd81的克隆表达及生物信息学分析

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1、分类号：密级：学校代码：10165学号：201111207遣掌师耗大学硕士学位论文④七鳃鳗(Lampetrajaponica)CD81的克隆表达及生物信息学分析作者姓名：学科、专业：葛漫丽细胞生物学研究方向：动物细胞信号转导导师姓名：刘欣教授2014年3月学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：

2、]象L埤学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：j善睥指导教师签名：二擎}碍之_—一签名日期：如IZ卜年眵月辽宁师范大学硕士学位论文摘要CD81属于四跨膜蛋白超家族(

3、transmembrane4superfamily，TM4SF)成员，广泛表达于不同的组织中，可促进细胞自身和细胞之间的信号转导并能跨膜作用于某些蛋白。CD8l可以参加几种病毒辨认与进入细胞，调节不同细胞的一系列生理反应过程。此外，CD81是B细胞和T细胞受体的组成成分，它们之间的相互作用会抑制信息的传递【1】。当前研究的主要内容是CD81在B．T细胞彼此作用中所起到的作用，以及分别在B细胞和T细胞中发挥的功能【2】。CD81在细胞膜上可与CD4、CD8、CDl9、CD21、HLA．DR和Ⅱ3Bl整合素等结合，并调控

4、丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)对宿主细胞的侵染，通过免疫作用刺激产生的CDSl抗体能有效的阻止HCV的侵染和传播等13】。目前的研究主要集中在高等脊椎动物，但在相对原始的无颚脊椎动物七鳃鳗中CD81的生物学功能还不清楚。在本文中，通过对脂肪体cDNA文库中的cDNA序列进行查找与生物信息学分析(此文库为本实验室构建的日本七鳃鳗(Lampetraiaponica)文库)，得到一条与已报道的哺乳动物CD81有较高同源性的序列，它能够翻译CD81蛋白的开放阅读框。以此序列信息为基础而设计引物并添加酶

5、切位点，随后以日本七鳃鳗脂肪体的总RNA作为模板，运用PCR扩增方法得到702bp的七鳃鳗CD81目的片段，并且构建pET42a(+)一CD81原核表达载体成功。将得到的七鳃鳗CD81氨基酸序列与其它不同物种中的CD81氨基酸序列比对分析后构建系统发育树。此外，还对其进行二级结构域模拟分析，三级结构域预测，亲疏水性预测，二硫键预测，抗原表位预测及保守基序的分布预测等。我们利用半定量PCR方法，检测CD8l在七鳃鳗白细胞、肾脏、心脏、肝脏、鳃和脂肪体对照组和灭活菌刺激组中的相对表达量，并分析对照组和刺激组CDSl表达水

6、平的变化情况。结论：七鳃鳗介于脊椎动物和无脊椎动物的中间位置，在其中CD81的发现，有助于深入探索CD81对七鳃鳗造血系统的调节机制以及脊椎动物中CD81蛋白的起源和进化，是更好地了解原始脊椎动物的造血系统和免疫调节过程的基础。关键词：七鳃鳗；CD81：进化；基因克隆表达；造血组织七鳃鳗CD81的克隆、表达与生物信息学分析Cloning，ExpressionandBioinformaticsAnalysisofCD81genefromLampetrajaponicaAbstractCD81isamemberofthe

7、tetraspaninfamilythathasbeendescribedtohaveakeyroleincellsignaltransduction，cellmigrationoftumorandimmunecellsandSOon．CD81isacomponentofBcellandTcellreceptor，theinteractionbetweenBcellandTcellCaninhibitthetransmissionofinfonIlation．CD81combinedwithCD4、CD8、CDl9、

8、CD21、HLA-DR、a3131，andregulationhepatitisCvirus(HCV)infectionhostcell．111epresentstudiesmainlyconcentratedinhighervertebrates．ButthebiologicalfunctionofCD81inprimitivevertebr