猪繁殖与呼吸综合征病毒两种快速诊断方法的建立与初步研究

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1、The俩0rapiddiagnosticmethodsandpreliminaryat)pllCationtOrporcinereproauCtlVeandresplratorysyndromeThesissubmittedtoQngDaoA97riculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyYinFeifei(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor

2、：ProfessorWangJinbaoQingdao．China独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：弘哆时间：沙fL年6月矽日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁

3、盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：宁。、{；时间：沙r易年／月易少日导师签名：z荔2、时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要猪繁殖与呼吸综合征病毒两种快速诊断方法的建立与初步应用摘要猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度传染性疫

4、病，又称“蓝耳病”，本病以妊娠母猪的繁殖障碍(后期流产、死胎、木乃伊胎、弱胎)及各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病(问质性肺炎)为主要特征。该病自从1987年首次在美国发现以来，迅速传播至全世界养猪发达的国家与地区，给养猪业造成了巨大的经济损失。本研究主要采用美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒SX．1株作为阳性对照，选取其保守的N蛋白基因中一段高度保守的基因序列为模板，设计了4条RT-LAMP的检测引物，通过优化反应条件，建立了一种快速检测PRRSV的RT-LAMP诊断方法．特异性和敏感性试验结果显示，该方法能够特异地检测美洲型PRRSV，

5、其最低检测限为lxl0～ng／gL，其敏感性比常规RT-PCR高104倍，且比较稳定，与常规RT-PCR西勺符合度达87％，判定检测结果时不需要借助昂贵的仪器设备，仅需加入l皿橙红色核酸染料就可以进行判断，颜色变绿判定为阳性，仍保持橙红色判定为阴性。RT-LAMP可以快速、直观、准确地检测PRRSV，是一种适合猪场现地应用的检测方法。运用柠檬酸三钠还原氯金酸方法，制备胶体金颗粒，最终选取直径约25nm的颗粒作为标记物，将纯化的PRRSV单抗与胶体金颗粒标记，最适标记浓度约为12p．g／ml，用喷膜仪将其两者结合物均匀喷至玻璃纤维膜上

6、，并于硝酸纤维素膜(NC膜)上分别喷上PRRSV单抗(T线)和抗鼠IgG(C线)，初步制成诊断PRRSV抗原的快速诊断试纸条，此方法的建立为我国进行PRRS抗原的检测和流行病学调查提供了一种快速简便的血清学方法。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)；RT-LAMP；胶体金；NC膜；现地检测青岛农业大学硕士学位论文ABSTRACTThetworapiddiagnosticmethodsandpreliminaryapplicationforporcinereproductiveandrespiratorysyndromeABS

7、TRACTPorcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)isahighiycontagiousdiseaseofpigscausedbyporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)，alsoknownas“blueeardisease”．ThemaincharacteristicofPRRSWaspregnantSOWSreproductivefailure(1atermiscarriage，stillbirth，mummi

8、fiedandweaktire)andrespiratorydisease(interstitialpneumonia)inavarietyofagepigs，especiallypiglets．PRRSwasdiscoveredfo