欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:33399347
大小:11.03 MB
页数:72页
时间:2019-02-25
《cik细胞对肺腺癌a549ddp细胞株的影响观察》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、遵义医学院硕士学位论文CIK细胞对肺腺癌A549/DDP细胞株的影响观察姓名:谢矅爵申请学位级别:硕士专业:内科学指导教师:李宁201205遵义医学院硕士学位论文CIK细胞对肺腺癌A549/DDP细胞株的影响观察CIK细胞对肺腺癌A549/DDP细胞株的影响观察摘要目的:CIK细胞对肺腺癌A549/DDP细胞株的影响观察。方法:取健康人外周血,应用密度梯度离心法分离单个核细胞,在体外使用IFN一1、工L—l、工L一2和人抗CD3单抗对PMBC进行诱导培养,使其增殖和成熟,分化为CIK细胞。应用徕卡显微系统观察CIK细胞、A549/
2、DDP细胞的形态学特征。成熟的CIK细胞与A549/DDP细胞共同培养,根据CIK细胞作用于A549/DDP细胞靶比浓度的不同将实验分为为4组:40:l靶比组、20:1靶比组、10:1靶比组和无CIK细胞作用的对照组,然后观察各组的形态学变化。另将实验分为5组:A549细胞组、A549/DDP细胞组、A549/DDP细胞一IL2培养组、CIK细胞作用于A549/DDP(10:1)组、单纯CIK组,运用RT—PCR、RQ—PCR和蛋白印迹Westernblot技术观察各组基因(mdr—l、mrp、gst一丌)和蛋白(P—gP、MRP
3、、GST一Ⅱ)的表达情况。结果:体外培养的CIK细胞悬浮生长,均匀分布,细胞体积小,呈圆形或椭圆形;体外培养的A549/DDP细胞贴壁生长,细胞体积大,呈多边形,桑椹样生长。CIK细胞和A549/DDP细胞共培养时,CIK细胞能明显影响A549/DDP细胞的生长,具有很强的杀伤效应。在靶比10:1的情况下即可观察到A549/DDP细胞生长状况不佳,在高效靶比40:l情况下,绝大部分A549/DDP细胞死亡。同时RT—PCR和RQ—PCR检测显示mdr一1、mrp和gst基因都参与了A549/DDP细胞对顺铂的耐药;在CIK细胞作用
4、下,A549/DDP细胞耐药基因mdr一1、mrp和gst的表达均明显下调;Westernblot结果显示耐药蛋白P一糖蛋白(P—gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)和谷胱苷肽转移酶一Ⅱ(GST—n)也都参与了A549/DDP细胞对顺铂的耐药;在CIK细胞作用下,A549/DDP细胞的耐药蛋白P—gP、MRP和GST一Ⅱ的表达也明显降低。结论:CIK细胞能明显抑制耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞的生长,攻击杀伤A549/DDP细胞;mdr—l、mrp和gst基因和蛋白都参与了A549/DDP细胞对顺铂的耐药;同时,CIK细胞能降低
5、A549/DDP细胞中重要的耐药基因和相关蛋白的表达,提示CIK细胞可能通过下调mdr—l、mrp和gst基因和蛋白的表达来逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。关键词:多药耐药,细胞因子诱导的杀伤细胞,肺腺癌4遵义医学院硕士学位论文CIK细胞对肺腺癌A549/DDP细胞株的影响观察TheimpactoftheCIKcellsOilDrug-resistanthumanlungadenocarcinomaA549/DDPcellsAbstractobjective:ToinvestigatetheeffectsofCIKcell
6、soncisplatinresistanthumanlungadenoearcinomaA549/DDPcells.Methods:PMBCwasextractedfromthehumanwholebloodusingficollgradientcentrifugation.IFN一1,IL一1,IL一2andanti-CD3monoclonalantibodywereaddedSOastoinducePMBCtotransitintoCIKcellsinvitro.UsingLeicamicroscopetoobservethe
7、morphologicalfeaturesofA549/DDPcellsandCIKcells.ThenCIKcellswereCO—culturedwithA549/DDPcells.AccordingtodifferenttargetratioofCIKcellstoA549/DDPcells,thegroupsweredividedintofourgroupsincluding40:1targetratiogroup,20:1group,10:1groupandnoCIKeffectgroupasthecontrolgrou
8、p.ThegrowthsofA549/DDPcellswerealsoinvestigatedunderLeicamicroscope.Concerninggeneandproteinexpression,experimentsweredivide
此文档下载收益归作者所有