cik细胞对肺腺癌a549ddp细胞株的影响观察

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1、遵义医学院硕士学位论文CIK细胞对肺腺癌A549/DDP细胞株的影响观察姓名：谢矅爵申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：李宁201205遵义医学院硕士学位论文CIK细胞对肺腺癌A549／DDP细胞株的影响观察CIK细胞对肺腺癌A549／DDP细胞株的影响观察摘要目的：CIK细胞对肺腺癌A549／DDP细胞株的影响观察。方法：取健康人外周血，应用密度梯度离心法分离单个核细胞，在体外使用IFN一1、工L—l、工L一2和人抗CD3单抗对PMBC进行诱导培养，使其增殖和成熟，分化为CIK细胞。应用徕卡显微系统观察CIK细胞、A549／

2、DDP细胞的形态学特征。成熟的CIK细胞与A549／DDP细胞共同培养，根据CIK细胞作用于A549／DDP细胞靶比浓度的不同将实验分为为4组：40：l靶比组、20：1靶比组、10：1靶比组和无CIK细胞作用的对照组，然后观察各组的形态学变化。另将实验分为5组：A549细胞组、A549／DDP细胞组、A549／DDP细胞一IL2培养组、CIK细胞作用于A549／DDP(10：1)组、单纯CIK组，运用RT—PCR、RQ—PCR和蛋白印迹Westernblot技术观察各组基因(mdr—l、mrp、gst一丌)和蛋白(P—gP、MRP

3、、GST一Ⅱ)的表达情况。结果：体外培养的CIK细胞悬浮生长，均匀分布，细胞体积小，呈圆形或椭圆形；体外培养的A549／DDP细胞贴壁生长，细胞体积大，呈多边形，桑椹样生长。CIK细胞和A549／DDP细胞共培养时，CIK细胞能明显影响A549／DDP细胞的生长，具有很强的杀伤效应。在靶比10：1的情况下即可观察到A549／DDP细胞生长状况不佳，在高效靶比40：l情况下，绝大部分A549／DDP细胞死亡。同时RT—PCR和RQ—PCR检测显示mdr一1、mrp和gst基因都参与了A549／DDP细胞对顺铂的耐药；在CIK细胞作用

4、下，A549／DDP细胞耐药基因mdr一1、mrp和gst的表达均明显下调；Westernblot结果显示耐药蛋白P一糖蛋白(P—gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)和谷胱苷肽转移酶一Ⅱ(GST—n)也都参与了A549／DDP细胞对顺铂的耐药；在CIK细胞作用下，A549／DDP细胞的耐药蛋白P—gP、MRP和GST一Ⅱ的表达也明显降低。结论：CIK细胞能明显抑制耐顺铂人肺腺癌A549／DDP细胞的生长，攻击杀伤A549／DDP细胞；mdr—l、mrp和gst基因和蛋白都参与了A549／DDP细胞对顺铂的耐药；同时，CIK细胞能降低

5、A549／DDP细胞中重要的耐药基因和相关蛋白的表达，提示CIK细胞可能通过下调mdr—l、mrp和gst基因和蛋白的表达来逆转A549／DDP细胞对顺铂的耐药性。关键词：多药耐药，细胞因子诱导的杀伤细胞，肺腺癌4遵义医学院硕士学位论文CIK细胞对肺腺癌A549／DDP细胞株的影响观察TheimpactoftheCIKcellsOilDrug-resistanthumanlungadenocarcinomaA549／DDPcellsAbstractobjective：ToinvestigatetheeffectsofCIKcell

6、soncisplatinresistanthumanlungadenoearcinomaA549／DDPcells．Methods：PMBCwasextractedfromthehumanwholebloodusingficollgradientcentrifugation．IFN一1，IL一1，IL一2andanti-CD3monoclonalantibodywereaddedSOastoinducePMBCtotransitintoCIKcellsinvitro．UsingLeicamicroscopetoobservethe

7、morphologicalfeaturesofA549／DDPcellsandCIKcells．ThenCIKcellswereCO—culturedwithA549／DDPcells．AccordingtodifferenttargetratioofCIKcellstoA549／DDPcells，thegroupsweredividedintofourgroupsincluding40：1targetratiogroup，20：1group，10：1groupandnoCIKeffectgroupasthecontrolgrou

8、p．ThegrowthsofA549／DDPcellswerealsoinvestigatedunderLeicamicroscope．Concerninggeneandproteinexpression，experimentsweredivide