上皮性卵巢癌中ret基因突变的检测与分析

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1、南开大学硕士学位论文上皮性卵巢癌中RET基因突变的检测与分析姓名：武丹丹申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：赵恩锋2012-05中文摘要背景：卵巢癌是女性生殖器常见的肿瘤之一，发病率仅次于宫颈癌和子宫体癌而列居第三位，但是其死亡率却居首位【1]，对妇女生命造成严重威胁。卵巢癌患者死亡率居高不下主要是由于卵巢癌生长部位隐蔽，患病初期很少出现症状，以致早期诊断困难，确诊时约70％已属晚期，而这些患者的5年生存率只有30％。因此研究卵巢癌的发生发展机制以寻找早期诊断及预防方法，探索有效的综合疗法，是提高

2、生存率、降低死亡率的关键。同其他肿瘤一样，卵巢癌的发生发展亦是与细胞增殖分化相关的原癌基因、抑癌基因多阶段相互作用的结果。充分认识卵巢癌特异性基因损害的机制有利于制定合理的基因诊断与治疗方案。RET原癌基因编码一种跨膜的酪氨酸蛋白激酶受体【2J，参与多种细胞内信号传导途径，从而调节细胞的存活、增殖及分化等过程。RET基因可因突变或重排而活化，导致细胞异常增殖而形成肿瘤，已经证实与多种人类癌症密切相关。目的：本研究旨在检测RET原癌基因在上皮性卵巢癌中的突变情况，分析其在卵巢癌发生发展过程中的作用，以期寻

3、找卵巢癌早期筛查和诊断的指标。方法：选取69例上皮性卵巢癌组织和11例正常卵巢组织，所有标本均经病理证实，且术前未进行化疗。手术切除标本立即置液氮速冻，后转．80℃保存。提取组织DNA，应用PCR技术对RET基因的20个外显子进行扩增，并对PCR产物序列直接进行双向测序。应用SeqScapev2．5序列分析软件对测序结果进行分析，然后提取RET突变患者石蜡包埋的正常组织DNA进行RET基因测序分析。结果：69例卵巢癌标本中检测出3种新的RET基因突变：第8外显子525密码子由CGG突变为UGG，所编码氨

4、基酸由精氨酸变为色氨酸(Ar9525Trp)；第11外显子641密码子由GCU突变为ACU，所编码氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸(Ala641Thr)；第18外显子1009密码子由AUG突变为ACG，所编码氨基酸由蛋氨酸变为苏氨酸(Metl009Thr)。3种突变均为杂合性错义点突变，总突变率均为4．35％(3／69)，正常卵巢中未检测到这3种突变，但两组标本中RET基因突变率无显著性差异(x2=0．02，P>0．05)。在RET基因突变患者正常组织中中文摘要未检测到RET基因突变，说明突变属于体细胞突变。另

5、外，在所有标本检测出三种已知的RET基因非同义单核苷酸多态性改变(rs35118262、rs9282834和rsl799939)，在两组标本中分布无显著性差异(P>0．05)。结论：上皮性卵巢癌组织中存在RET原癌基因体细胞突变，且突变位点为首次发现的新位点。但是突变率较低，还不能说明RET基因突变与上皮性卵巢癌有关，有待进一步探索。中国人卵巢癌组织及正常卵巢组织中存在3种RET基因的非同义性单核苷酸多态性位点，但两种组织中等位基因分布频率均无显著差异，不能表明RET基因的这3种多态性与卵巢癌相关。关键

6、词：上皮性卵巢癌，RET基因，突变，PCR，双向测序AbstractBackground：Theincidencerateofovariancanceristhethirdamongallthegynecologictumors，whileitsdeathrateisthefirst．Theearlydiagnosisofovariancancerisdifficultbecauseofthehiddengrowingareasandunobvioussymptomsatearlystage，SOabo

7、ut70％ofpatientsarediagnosisaslate。stageovariancancerwhentheyseeadoctor．Thefive—yearsurvivalofthesepatientsisonly30％．Therefore，thestudyaboutthemechanismofthecarcinogenesisanddevelopmentofovariancancerisveryimportanttoreducethedeathrate．REToncogeneencodeso

8、nekindoftransmembrancetyrosinekinasereceptorandisinvolvedinmanycellsignalingpathways．RETgenecanbeactivedbymutationorrearrangementleadingtoabnormalcellproliferationanddifferentiation．ManystudieshaveindicatedthatRETgeneisclo