tweak在上皮性卵巢癌转移中的作用初探

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1、上海交通大学博士学位论文TWEAK在上皮性卵巢癌转移中的作用初探姓名：顾李颖申请学位级别：博士专业：妇产科学指导教师：狄文201204上海交通大学医学院2009级博士学位论文TWEAK在上皮性卵巢癌转移中的作用初探摘要研究目的：肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)是肿瘤坏死因子超家族的新成员，通过与其受体成纤维细胞因子诱导14(Fnl4)结合后发挥作用。TWEAK及其受体Fnl4在多种肿瘤细胞与组织中表达，具有广泛的生物学活性，在诱导细胞凋亡，促进细胞增殖和血管形成，提高细胞侵袭力，诱导炎症因子表达等方

2、面发挥作用。研究表明TWEAK、Fnl4在人卵巢癌组织中表达，但TWEAK、Fnl4在卵巢癌发生发展，侵袭和转移以及对免疫细胞的作用及作用机制尚未见报道。本研究目的在于通过对TWEAK在卵巢癌转移中起到的作用进行初步探讨，对今后发展新的治疗方法提供有价值的实验参考数据。研究方法：1．采用体外实验的方法观察TWEAK对HO．8910PM细胞侵袭、移动和粘附能力的影响，观察TWEAK对细胞Iv,B．0【、NF．r,．B(P65)和VEGF蛋白表达的影响，以及应用NF．r,B拮抗剂吡咯醛二硫氨基甲酸(pyrroli

3、dinedithiocarbamate，PDTC)处理后VEGF的变化趋势，探讨TWEAK在卵巢癌细胞侵袭转移中的作用、可能机制及其信号传导途径。V上海交通大学医学院2009级博士学位论文2．使用免疫组化方法检测不同卵巢肿瘤组织中TWEAK，Fnl4，VEGF，微血管(CD34)的表达情况。对表达情况进行分析，并与样本的临床信息进行相关统计，寻找TWEAK，Fnl4；VEGF,微血管(CD34)在卵巢癌发生发展过程中的表达特点及其相互之间的关系。3．采用体外细胞共培养的实验方法，观察TWEAK刺激后的THP一

4、1细胞上清对卵巢癌细胞HO．8910PM在细胞增殖、侵袭能力上的影响。使用realtimePCR及ELISA方法检测TWEAK刺激后HO．8910PM中MCP．1mRNA以及蛋白的表达变化，采用ELISA方法检测TWEAK刺激后THP．1细胞表达TNF．a的变化。采用TWEAK与TNF．Ⅱ共刺激的方法观察卵巢癌细胞的增殖能力。阐述TWEAK刺激后的巨噬细胞在卵巢癌转移中可能起到作用的途径。4．采用体外实验的方法探讨NF．r．B微小RNAl99a在细胞侵袭、转移能力的影响，采用westernblot的方法观察微

5、小RNAl99a转染细胞后，对细胞内NF．1(B通路的影响，寻找微小RNAl99a与TWEAK在细胞侵袭转移中的共通点及相互关系，为今后的研究打下基础。研究结果：1．TWEAK对人卵巢癌细胞HO．8910PM增殖、侵袭、转移的影响及其机制研究。(1)TWEAK对人卵巢癌细胞HO一8910PM的增殖没有影响。(2)TWEAK能够增强HO一8910PM细胞对Matrigel的粘附能力。VI上海交通大学医学院2009级博士学位论文(3)TWEAK能促进HO-8910PM细胞的迁移和侵袭能力。(4)TWEAK能在HO

6、．8910PM细胞中促进NF一1cB的激活以及Ird3的磷酸化。(5)TWEAK通过NF—rB通路的激活能够促进VEGF的表达。(6)NF．rJ3抑制剂能够抑制TWEAK诱导的细胞粘附迁移和侵袭。2．TWEAK，Fnl4，VEGF以及新生微血管(CD34)在卵巢癌组织中的表达及其相关病理资料分析(1)TWEAK和Fnl4的表达水平在恶性肿瘤中要远远高于良性肿瘤(P

7、4的表达，结果各组也均无统计学差异，只要是卵巢癌，其表达均在80％以上。(4)不同卵巢组织中VEGF的表达有统计学差异；各组间微血管(CD34)计数有统计学差异，均以恶性肿瘤组为最高。(5)TWEAK与VEGF的表达呈一个正相关的形式(CorrelationCoefjficient=0．704)。3．TWEAK对巨噬细胞的影响在卵巢癌转移中的作用研究。(1)TWEAK能够通过刺激巨噬细胞影响HO．8910PM细胞的增殖力。(2)TWEAK能够通过巨噬细胞来抑$tJHO．8910PM细胞的侵袭能力。Ⅶ上海交通大

8、学医学院2009级博士学位论文(3)TWEAK能够诱导HO．8910PM细胞MCP．1(单核细胞趋化蛋白．1)mRNA以及蛋白的表达。(4)TWEAK能够上调THP-1细胞TNF．仅的表达。(5)TWEAK和TNF．仅共同作用能够抑制HO-8910PM的增殖。4．有关NF．KB通路与miR．199a在细胞侵袭转移中的扩展研究(1)MiR-199a在内异症患者中的在位内膜和卵巢异位内膜中的表达是降低的