水蛭素对岛状皮瓣缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文水蛭素对岛状皮瓣缺血再灌注损伤保护作用的实验研究姓名：戴帆申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：仇树林201203中文摘要，．．。．⋯，水蛭素对岛状皮瓣缺血再灌注损伤保护作用的实验研究。摘一要’’t～目的：通过制作大鼠腹部皮瓣缺血再灌注(ischemia-reperfusionI壤)损伤模型，并给予不同浓度的天然水蛭素《Himdin)’进行干预f观察其对皮瓣成活面积及组织形态变化的影响，以期证实水蛭素防止岛状皮瓣缺血再灌注损伤的作用；应用生物化学及免疫组化方法，测定皮瓣组织中内皮素(endothelin，ET)、超氧化物歧化酶(supe

2、roxidedismutase，SOD)、丙二醛(malonaldehyde，MDA)和核转录因子(NFy．KB、肿瘤坏死因予(TNF．Q)的含量，观察其变化规律，进一步探讨水蛭素的作腭机制，为解决皮瓣移植术后因缺血再灌注损伤而导致皮瓣成活率减低这一难题提供新方法及客观的实验依据。方法：～一l实验动物：雄性健康Wistar大鼠116只，。。体重，(300+_20)g，’河北医科大学动物实验中心提供，称重、编号“．2动物分组：一将大鼠随机分为：非缺血再灌注。．(菲取>组v缺血再灌注，(IR)组、天然水蛭素0．5mg／kg组(n05组)、天然水蛭素1．0mg／kg组

3、(H1．o：组)4组，各29只。每组大鼠除8只用于测定皮瓣成活率，1只用于留取电镜标本外，剩余20只再按手术时间随机分为术后即刻、8h、10h、jt6h、‘32h五个亚组。，‘3模型制备：于右腹部设计6．0cmX3．0cm岛状皮瓣，皮瓣长轴与大鼠长轴平行，以腹壁浅血管为蒂，以腹正中线为内侧边，J达腹股沟水平，深至皮下肉膜层。非．瓜组：切开后原位缝合：，不做任何处理；其余三组：’。缝扎腹壁浅动脉发出点远端股动脉，切断除腹壁浅血管外其他分支，血管夹夹闭发出点近端股动脉，皮瓣原位缝合。持续缺血8h后取出动脉夹，．确认血管再通。⋯4给药：非IR组不用药，取组L凰5组及H

4、1．o组大鼠自术前一天起分别向皮下注射生理盐水)0．5mg／kg及1．0mg／kg天然水蛭素注射液，每8h一。次，给药体积均为0．5ml，：．给药位置均在皮瓣正下方·’j’一．；～?j：：≯‘’5取材：各实验组所分亚组内的4只大鼠按分组时间分别于皮瓣中段近中中文摘要‘．一一一。．．一_上。一．一o“。。——————。——————————————。——————。‘———。—————’————————。—————————’—。—。—。1‘‘‘。‘—。●。——____一“心处取1．Ocm×0．5cmX0．2cm全层皮瓣组织两块；每块组织均贫为甄份争。．

5、，一份用于生化

6、检查，另一份制作石蜡切片。术后16h_(再灌注后8h)，亚维一内余下一只大鼠在同样位置取1．0mm×2．0mmX2．0mm全层皮瓣组织，用．一’于透射电镜观察。‘‘6观测指标：’6．1皮瓣成活率：术后第7天观察各组大鼠腹部皮瓣成活情况’。’以皮瓣淡：红色，质地柔软，毛发恢复生长为成活；。以皮瓣变硬，颜色转黑、结痂为：j坏死标准。用数码相机对各组皮瓣拍照并输入计算机i通过。Image-ProPlus．v6．0图形分析系统计算皮瓣成活面积占总面积的百分比d√．6．2组织学观察：(1)光镜观察：部分石蜡切片进行HE染色；观察组织+结构变化；(2)透射电镜观察：电镜标本

7、用3％戊二醛固定3h，1％锇酸‘固定lh，常规脱水、包埋，制作超薄切片观察基底细胞线粒体及粗面内．。：j质网的改变。’．．，，’‘’6．3生化检测：所取另一部分标本制成10％组织匀浆，按照试剂盒说明测定ET、MDA含量及SOD活性；⋯一．⋯．+．6．4免疫组化检测：部分石蜡切片进行免疫组化染色，每亚组任选8．张切‘片，每张切片随机选5个互不重叠分割区i利用HMIAS-2000高清晰度彩·色医学图文分析系统检测NF．KB、TNF．Q阳性细胞的表达并计数々-三』：一7统计学处理：用SPSS13．0统计学软件处理数据，组闶样本均数比较采‘用单因素方差分析，有显著差异者

8、进行SNK-q检验。P≤O．05为差异有统一～●计学意义。．+’’●一结果：．．‘一，，+‘l皮瓣成活情况；术后7天，IR组大鼠皮瓣大面积坏死，颜色变黑，一质地变硬，皮瓣回缩，表面痂壳形成l切开后未见明显出血，、肉膜下分泌物较多．．Ho．5组及H1．o组皮瓣大部分成活良好k近、中段皮瓣颜色淡红，弹。性较好，表面可见少量毛发生长，远端部分皮瓣颜色逐渐加深，．表面散在：‘黑色痂皮，易剥脱，切开后可见少量渗血量肉膜下仅少量分泌物；菲’破i组皮瓣呈淡红色，弹性良好，毛发生长均匀，几乎全部成活。。一．一．一i?皮瓣存活率：非IR组(98．00+1．08m>HD．5组(65

9、,．324-3．33)％