阿魏酸钠对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文阿魏酸钠对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤保护作用的实验研究姓名：陈英标申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：仇树林201203中文摘要一阿魏酸钠对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤保护作用的实验研究摘要．．．．．?一一。目的：本研究通过给大鼠腹腔内注射阿魏酸钠，观察其对大鼠腹部缺·血再灌注轴形皮瓣成活面积以及组织学变化的影响，观测其对再灌注前后。皮瓣组织中丙二醛(慨)、超氧化物歧化酶(SoD>、—氧化氮(No)0’：内皮素(ET)水平的变化i以及皮瓣内皮细胞核因子(NF．心)、肿瘤坏死因子(TNF)表达的影响，以探明阿魏酸钠减轻皮瓣缺血再灌注损伤的作用机制，为临床应用提供客观的实验依

2、据。‘一．。_’方法：选择健康Wistar。大鼠(雌雄不限)96只，体重3009-3509(购自河。北医科大学实验动物中心)·将大鼠随机分为4组，每组24只。A组：无缺血再灌注对照组(None-IR对照组)；B组：缺血再灌注生理盐水对照组(NS．IR对照组)；C组：缺血再灌注组20mg／Kg阿魏酸钠实验组‘(Smali-SF．IR实验组)毒D组：缺血再灌注组40mg／Kg阿魏酸钠实验组．．u(Large．SF．IR实验组)．·：一』：⋯二。：。j．一■．．。⋯。．．．所有大鼠于术前两天用8％硫化钠脱毛，术时用10％水合氯醛．(30mg／kg)腹腔注射麻醉o．_⋯．．’NS．IR对照组，参照

3、PetryJJ等描述的方法，充分游离腹壁浅动脉发出点部位的股动脉段，结扎远端的股动脉，微血管夹夹闭其发出点近侧的股动脉，于右下腹形成一面积为3cmX6cm，以腹壁浅血管为蒂的轴形皮瓣，皮瓣形成后原位缝合口皮瓣缺血№小时后予以再灌注L并于术前k；j再灌注前10rain、再灌注后8h腹腔内注射生理盐水0．5ml。取8只大鼠于一掀起皮瓣后即刻、再灌注后2h分别于皮瓣中段边缘取大小约1．0cmXO．5cm全层皮瓣组织织。所取组织部分用4％多聚甲醛即时固定待做HE。染色石蜡切片观察皮瓣组织的结构变化，，以及免疫组化染色观察NF．r．B、TNF在内皮细胞的表达情况，部分冰冻保存制作组织匀浆，‘生化检测

4、．SOD0MDA，NO、耵，考马斯亮蓝蛋A(TP)·再灌注后2ll已取完标本·。的8只，另任取2只在冰板上，于皮瓣中央取一0．IcmX0．3em的组织，即时用3％戊二醛固定待做透视电镜超薄切片以观察组织超微结构的改中文撼要、．_·__-_--__·---_·。____l。--·___-·_。l___l●__。__·--·__ttL--___-·---_____-’_____-·。_·_。_。。‘。’-__-●。‘。’__。。。_-’’。‘’‘—‘—‘’。’。。。‘‘’‘。。’。’。。。‘’。。‘’‘一变。另8只于再灌注后8h,24h同样取材，同样处理，待检测相同内容。“另外8只不取材，于术

5、后7天观察成活情况，并计算皮瓣成活率p一-L'7"一．．：．．一·．Small．SF．IR实验组、Large．SF．IR实验组将分别给予腹腔注射20mg／Kg及40mg／Kg阿魏酸钠，其余操作同NS—IR对照组。⋯～None．IR对照组，皮瓣形成后原位缝合，不做其他处理，8只大鼠分别于掀起皮瓣即刻、术后12K另8只于lSh,34h用同法取材J其余操作同．．其他组．，，。，：～术后第7d肉眼观察大鼠皮瓣成活的情况。通过观察皮瓣外观、颜色⋯及质地等来判断皮瓣是否坏死。用硫酸纸描绘皮瓣坏死情况，用硫酸纸称．重法计算皮瓣成活率(皮瓣成活率罱成活部分硫酸纸重量／硫酸纸总重量．．一x100％)。I．一

6、·一一’--．。所有生化检测SOD．MDA、NO，ET值均经考马斯亮蓝蛋白校正。，．．‘’光镜观察NF-r,B、TNF的表达和分布部位。应用HMIAS．2000高清晰度彩色医学图文分析系统软件，每张切片随机选择互不重叠的5个400倍视野，测其阳性细胞的平均光度值，并计算其平均值，’最后整理数据，．。：进行统计学处理。-、。所有数据应用SPSSl3．0-软件对数据进行处理·组问差异比较采用单‘：因素方差分析进行两两比较，⋯以P<0．05为有显著性差异-～．‘r-_‘～·一一结果：‘l“。l’、皮瓣大体观察：’。·．．。：话术后7天，None-tR对照组皮瓣全部成活，末见坏死皮瓣颜色红润，．皮

7、瓣无萎缩，皮瓣弹性较好，皮温正常。NS．IR对照组，可见皮瓣申、远端大部分坏死，呈浅黑色至黑褐色：部分已结痂，弹性差，皮温冰凉，‘皮一瓣明显萎缩变小，V掀起远端皮瓣，．痂下有少许炎性分泌物tSmall—SF-IR实验组、．Large-SF．IR实验组皮瓣坏死情况类似，皮瓣远端也出现部分坏～死，但面积较NS-IR对照组夺，皮瓣近端颜色淡红，质地柔软i远端呈黑褐色，质地变硬，弹性差·”可见，None-IR对照组皮瓣成活情况明