单核细胞源性微囊泡产生机制与其对肾小球系膜细胞的影响

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1、万方数据分类号：R587．I密级：学位类别：科学学位口专业学位回学校代码：1062学号：2011602607学科门类：医学又肄鼍斜袁号硕士学位论文论文题目：单核细胞源性微囊泡产生机制及其对肾小球系膜细胞的影响TITLETheMechanismofMonocyte—deprivedMicrovesiclesanditsPossibleImpactonMesangialCells一级学科：临床医学二级学科：内科学内分泌与代谢病论文作者：俞婧指导教师：孙丽荣教授导师组成员：李明珍副主任医师博士聂秀玲副主任医师博士天津医科大学研究

2、生院二0一四年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：煎!遗日期：，牛年r月如日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密函。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：，7殍日期：一年上月跏日导师签名：。—￡毛叠馥日期：，单年r月细日万方数据天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：应用细胞模型研究高糖环境下单核细胞产生微囊泡的机制及其对人肾小球系膜细胞的影响。方法：以体外培养单核细胞(THP-1)、人肾小球系膜细胞(HRMC)为研究模型，高糖处理选取的葡萄糖浓度为30mM。1．以MitoSox为探针，采用

4、流式细胞仪检测高糖刺激THP-1细胞2h、4h、12h、24h、48h，线粒体内超氧化物含量。2．采用ELISA法检测高糖刺激THP-1细胞24h产生Mv及P38抑制剂的干预作用。3．采用组织因子(TF)活性底物发色法检测THP—l细胞源性Mv的促凝血活性(PCA)。4．分离THP-1细胞源性蝌，处理HRMC细胞，应用WesternBlot法检测HRMC细胞24h、48h、72h后VEGF、HIFla蛋白表达的变化。结果：1．流式细胞仪检测示：30mM葡萄糖刺激THP一1细胞后，线粒体超氧化物水平在2h、4h、12h、24

5、h、48h分别为0h的2．0、2．1、2．5、2．8、3．0倍(P<0．01)，随时间的延长呈逐步递增趋势，差异有统计学意义(P<0．01)。2．ELISA结果示：与对照组相比，高糖组Mv产生显著增加，约为对照组的4．6倍(P<0．01)。与高糖组相比，高糖+P38抑制剂组Mv产生显著减少，大约减少了66％(P<0．01)，而对照组与对照+P38抑制剂组Mv无明显差异(P>0．05)。3．TF活性底物发色法结果示：与对照组相比，高糖组TF表达显著增加，约为对照组的5．1倍(P<0．01)。与高糖组相比，高糖+P38抑制剂组

6、TF表达显著减少，大约减少了78％(P<0．01)，而对照组与对照+P38抑制剂组TF表达无明显差异。4．WesternBlot结果显示：随Mv处理时间延长，HRMC细胞VEGF蛋白表达呈上升趋势，24h时无明显变化，48h、72h时VEGF蛋白相对表达明显增多(P<0．01)；随Mv处理时间延长，HRMC细胞HIFla蛋白表达呈上升趋势，24h时无显著差异，48h、72h时HIFla蛋白相对表达明显增多(P<0．01)。万方数据天津医科大学硕士学位论文结论：1．高糖可经线粒体途径增加THP-1细胞氧化应激。2．高糖可刺激

7、THP_l细胞产生孵，并具有促凝活性。3．高糖刺激THP-1细胞Mv的产生可能通过P38／MAPK途径。4．THP—l源性沁可增加入肾小球系膜细胞VEGF及HIFla蛋白表达。关键词：微囊泡高糖氧化应激糖尿病肾病万方数据天津医科大学硕士学位论文AbstractObjective：Investigatethemechanismofmonocytesproducemicrovesiclesandtheirimpactonhumanglomerularmesangialcellsunderhi!ghglucosebyc．ellr

8、esearch．Methods：Invitro，theT耶-1andHRMC(humanglomerularmesangialcells)wereculturedasresearchmodels．GlucoseconcentrationWas30mMashigllglucose．1．Afterhi．曲g