青岛地区宫颈病变组织中人乳头廇病毒16型l1基因多态性分析

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1、青岛大学硕士学位论文青岛地区宫颈病变组织中人乳头廇病毒16型L1基因多态性分析姓名：孙欣申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：王言奎20120610青岛地区宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型Ll基因多态性分析摘要目的HPV病毒基因存在变异，且具有种族和地域特异性。本研究通过对不同宫颈病变组织中HPVl6L1基因的检测和序列对比，分析了青岛地区宫颈病变患者HPVl6Ll基因结构特点和变异规律，探讨基因变异与宫颈癌的相关性，为高特异性疫苗的研制提供实验基础。材料与方法(1)收集LlI东青岛地区宫颈癌新鲜组织61例，经病理诊断为宫颈鳞状I：皮细胞癌；LCT(液肇细胞学检查)标本300例，其中J下常

2、细胞47例，LSlL(低度鳞状．卜皮内病变)100例，HSIL(高度鳞状上皮内病变)153例。300例LCT标本tp有明确病理诊断哲181例，其中慢性寓颈炎40例，宜颈L皮内瘤变(cervicalintraepitheliaineoplasia，CIN)l-111级14l例。(2)删蛋f{酶K法，分别提取新鲜组织和细胞DNA。(3)以提取的DNA为模扳，采蚪jPCR技术，以通『fJ引物MY09／1l筛选{J：感染HPV的标本，然后H]HPVl6e#J．特并性fjl物筛选ltlttPVl6l；l仲p标本。(4)以HPVl6阳性标本DNA为模极，扩增Ll毖冈今序列。(5)所获PCR?’：物行綮凶伞

3、序列测序，心jl

4、DNASI’AR软件，!一德1日ttPV标准株进{J二比对分析，习．找HPVl6I。1的突变位点，分析核仆酸和氰肚睃的变肄．比较热点突变化点突变频率n：再纡i的蓐异，并‘j其他【列家j芒他地I必突变化点进行比较。结果(1)慢性寓颈炎组，CIN组、寓颧瓣组lttPV感染率分别为75．0％(30／40)、89．4％(126／141)和93．4％(57／61)。3约I棚比较，芹异彳J．统计学意义(X：=8．370，P=O．015)。小常细胞、LSII．、lISIL、禽颈}f*细胞约lHPV感染牢分别为55．3％(26／47)，61．o％(61／100)、81．7％(125／153)

5、和93．4％(57／61)。4fll,14J比较，芹畀订统计学意义(X2=34．405，，)=0．000)。(2)悭．

6、，￡冉颈炎fl!、CIN纠、“绷稚卯i¨PVI6感染；爷分)；IJ为30．O％(12／40)、41．I％158Il41)8165．6％(40／61)，3绀丰ll比较，芹并仃统汁’’等意义(X!=14．874，P=0．001)。II：常细胞、LSII。、lISII。、n预糖细胞纠¨IPVl6感染二年分》；IJ为10，6％(5／47)、32．0％(32／100)、53．6％(82／l53)f1165．6％(40／61)。4幻141川：较．爿i”介统iI’≯患义f×2—44303，

7、P：0．000)。(3)所有经过病理诊断的标本中，共有96成功扩增出Ll基因，其中慢性宫颈炎lO例、CrNI～III53例、宫颈癌33例，其扩增率分别为25．O％、37．6％和54．1％。所有LCT标本中，共有136例成功扩增出L1基因，其中HSIL70例，LSIL28例，J下常细胞抹片5例。(4)Ll基因共发现13处变异，所有标本均发生C6240G、A6432G、6902insATC、6954delGAT及G7061A(无义)5处突变。另一突变热点为A6178C，其在慢性宫颈炎、CIN、宫颈癌3组间频率分布没有显著性差异(X2--1．265，P=-0．531)，在正常细胞、LSIL、HSIL

8、、宫颈癌细胞4组问频率分布办没有显著性差异(X2=6．705，P=O．082)。结论(1)青岛地区HPVl6LI基因存在多态性，最常见的突变位点为C6240G、A6432G、6902insATC、6954delGAT、G7061A(无义)及A6178C。HPVl6LI基因的多态性具有明显的地域性特征。(2)青岛地区HPVl6LI基因的多态性可能导致病毒地方株的免疫原性和抗原性改变，但与宫颈癌的发生发展没有明显关系。硕士研究生：孙欣(妇产科学)指导教师：王言奎教授关键词：宫颈疾病：人乳头瘤病毒16型：L1基因；突变ObjectiveAnalysisofHPVl6L1genevariantsofd

9、ifferentcervicallesionsinQingdaoabstractHumanpapillomavirus(HPV)hasanumberofintratypicvariants，withracialspecificityanddifferentgeographicaldistribution．Thisstudywasperformedtodetectsequencevariantsof