bevacizumab对人脉络膜黑芭素瘤细胞株ocm--1增殖和侵袭能力的抑制作用及机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文Bevacizumab对人脉络膜黑芭素瘤细胞株OCM--1增殖和侵袭能力的抑制作用及机制研究姓名：曾蕊申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：李文生2012-05-17温州医学院硕士学位论文Bevacizumab对人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM．1增殖和侵袭能力的抑制作用及机制研究中文摘要目的：通过体外实验探讨抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体(Bevacizumab)对脉络膜黑色素瘤(CM)细胞株OCM．1增殖和侵袭作用的影响以及可能的作用机制。方法：实验研究。应用lOgg／ml和lOOgg／ml两个浓度的Bevacizumab作用于

2、体外培养的OCM．1细胞。MTT法检测不同浓度药物对细胞的增殖抑制率；肿瘤细胞侵袭实验检测药物对细胞侵袭力的影响；RT-PCR法检测OCM．1细胞中VEGF受体的表达及加药后的变化情况；ELISA和RT-PCR法分别检测药物作用细胞后VEGF、survivin两因子蛋白和mRNA的变化；Westemblot检测不同加药浓度下磷酸化AKT(p—AKT)和磷酸化Erkl／2(p．Erkl／2)的变化。结果：不同浓度Bevacizumab对OCM．1细胞的增殖抑制率分别为：8．54％和14．30％，差异均有统计学意义(F=26．8，P<0．05)；肿瘤细胞侵袭实验显示

3、Bevacizumab对细胞的侵袭能力有抑制作用，对照组、1099／ml和100pg／ml加药组侵袭过膜细胞数分别为：(128．83+21．48)、(64．67+15．92)和(37．67+12．26)个／(10×)视野，差异有统计学意义(F=45．63，P

4、NA表达无明显差异；ELISA法检测以上三组VEGF和survivin表达量分别为：(711．44士107．90)、(194．26+56．34)、(114．73士35．02)pg／ml和(688．05土143．97)、(359．91士57．38)、(89．45士28．26)pg／ml，差异有统计学意义(F=65．19，P<0．05；F=43．45，P<0．05)；Westernblot结果显示：各实验药组p-AKT和p-Erkl／2的相对表达量分别为：(0．86+0．11)、(0．63士0．08)、(0．36士0．10)和(0．63士0．06)、(0．45土0．

5、06)、fO．32士0．05)，p-AKT和p-Erkl／2随加药浓度的增加，表达量逐渐下降，差异有统计学意义(庐26．21，P<0．05；F=28．39，P<0．05)。4垫型堕堂堕堡主堂垡笙茎—————————————————————————————————————一结论：抗VEGF单克隆抗体Bevacizumab可以通过中和OCM-1细胞分泌的VEGF，降低VEGF与VEGFR．1的特异性结合，进而抑制OCM-1细胞的增殖和侵袭，其作用机制可能是通过信号通路P13KErkl／2来实现的。关键词：脉络膜黑色素瘤；Bevacizumab；血管内皮生长因子；血管

6、内皮生长因子受体；survivin；p-AKT：p-Erkl／2温州医学院硕士学位论文InhibitionofChoroidalMelanomaCellLine0CM．1ProliferationandInvasionbyBevacizumabthroughDownregulationoftheP--ERKl／2andP··AKTPathwaysAbstractObjective：Toinvestigatetheinhibitoryeffectandpossiblemechanismofanti-vascularendothelialgrowthfactor(V

7、EGF)monoclonalantibody(Bevacizumab)ontheproliferationandinvasionofchoroidalmelanoma(CM)celllinesOCM-1invitro．Methods：Experimentalresearch．TwoconcentrationswithlOlxg／mland1001xg／mlofBevacizumabwereaddedtoOCM一1cellsinvitro．Theinhibitratioofcellproliferationandinvasivebehaviorsweremeasu

8、redbyMTTandi