尼古丁通过pi3kakt信号通路保护大鼠软骨细胞抵抗白介素-1诱导的细胞凋亡

《尼古丁通过pi3kakt信号通路保护大鼠软骨细胞抵抗白介素-1诱导的细胞凋亡》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、厦门大学硕士学位论文尼古丁通过PI3K/Akt信号通路保护大鼠软骨细胞抵抗白介素－－1诱导的细胞凋亡姓名：郑欣鹏申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：夏春201204摘要目的：探索尼古丁对IL．1p诱导的大鼠OA软骨细胞(模拟OA软骨细胞)的调节作用，观察是否能够通过激活软骨细胞内P13l；矾气l(t信号通路而抑制OA软骨细胞调亡、维持其存活；同时结合大鼠OA动物模型检测尼古丁对OA软骨组织损伤的影响，为将来临床上应用尼古丁预防与治疗OA的可能机制提供理论依据。方法：体外实验：(1)软骨细胞分离培养：从新生大鼠关节软骨中分离出软骨细胞，使用特殊染色及免疫组化对其进行鉴定，并使其与软骨

2、细胞凋亡诱导调节剂IL．1p(10ng／m1)共培养2小时，模拟体外OA软骨细胞。(2)软骨细胞生存能力检测：经尼古丁处理后，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测软骨细胞活性。(3)软骨细胞凋亡率检测：采用流式细胞仪荧光素碘化丙啶(Propidi啪Iodide，PI)单标法检测软骨细胞晚期凋亡率。(4)P13K，Ah通路及相关信号分子的检测：蛋白免疫印迹法(Westemblotting)检测AI(t，p．Ah及其下游信号分子bcl．d、bcl．2和p70S6，核糖体S6激酶的蛋白分泌水平；反转录RCR(Rever∞1’rans嘶ption-PolymeraSeCtl血Ikact

3、ion)检测Aktl-mRNA的表达水平。．体内试验：(1)大鼠膝关节动物模型建立：通过右膝关节前交叉韧带切除+内侧半月板切除术构建大鼠骨性关节炎(OA)模型。(2)尼古丁对大鼠骨性关节炎关节软骨作用观察：关节腔注射尼古丁，组织学与免疫组化技术评估大鼠骨性关节炎关节软骨形态结构变化及与P13圣矾气l(t信号通路相互关系。结果：(1)体外实验：经分离的细胞甲苯胺蓝着色胞浆染成浅蓝色，可见1．3个核仁，呈紫蓝色；细胞周围亦有少量异染颗粒出现，lI型胶原呈强阳性表达，细胞浆内有黄染颗粒，胞核基本无着色；尼古丁可刺激由IL．1p诱导的大鼠骨性关节炎软骨细胞的活性而抑制其凋亡。对大鼠骨性关节炎软

4、骨细胞处以尼古丁可上调p触蛋白表达水平，但却未能提高魅I-mRNA的表达水平。进一步的实验检测到尼古丁可增强部分AI(t下游分子：p70S6、核糖体S6激酶、bcl．xl、bcl．2、TIMP．1的表达，但是却抑制了MⅧ．13的表达。(2)体内试验：大鼠骨性关节炎关节腔注射尼古丁促进损伤软骨表面的修复，增加了表面软骨的厚度，同时提高了p．心的蛋白表达。结论：．尼古丁可部分通过激活P13K／Akt信号通路保护由IL．1B诱导的大鼠骨性关节炎模型软骨细胞的细胞凋亡；同时减缓骨性关节炎导致的关节软骨组织的损伤。为此，尼古丁通过关节腔注射将有望成为骨性关节炎的一种预防与治疗试剂。关键词：尼古丁

5、白介素．1p软骨细胞凋亡骨性关节炎ⅡAbstractO巧ective．Toident毋thee脏ctsofIlicotinconchondrocyteapop惦sisi11mtoSteoanllritis(OA)wKchiIlducedbyIL一1DandtllemechaIlisminvi仃。觚di11vivo．1’0obServethatitisfeaSiblet0ir吐libitechon(kocyteapoptosisarldke印chondrocyte沁Vi、棚iIlfatoSteoan城tis(OA)viaactivat堍P13魁Aktsi舯alingpa曲啪y．Meal：

6、1wKle，combiniIlgtogettlert量lattlleprotectiVee岱：ctofIlicoti腿onOAcartilagetissuedaIIlage，t0pr0Videt量lepotentiaJmeoreticalf-0uIldation旬rpreVenting觚dhealiI玛OAincli血cwitllflicotiIleiIlthe6mlre．Memods．hlVi们，Chondroc”eswere舶sblyisolated舶mnewlybomrat，Th姐ChondrocyteswercexposuredtoIL·1p(10蜘L)for2h诋chbein

7、gused嬲amodulatiI玛aIldchoI浊．0cyte印optosisi11ducingagemrneaIlwllilewereidemified诵thaIIlIIloIliumⅡlethylbenzeneblue觚dIIcollagenimmllllohiStochemig时technology-ARer由reatiI玛witllllicotille，theVia_bilit)rofchondroc”eswereanalyzedby