shrna干扰沉默fancd2对人头颈鳞癌sihn005a细胞体外生长及化疗敏感性影响

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1、比较FANCD2沉默对SIHN-005A细胞细胞周期的影响；（5）CCK-8及Hoechst染色法比较各组细胞在加用DNA交联剂顺铂（Cis-diamminedichloroplatinum，CDDP）干预后增殖、凋亡变化，WestermBlot蛋白印迹法检测FANCD2shRNA沉默CyclinD1蛋白表达变化，比较FANCD2shRNA沉默对SIHN-005A细胞化疗敏感性的影响；（6）WestermBlot蛋白印迹法检测三组细胞未干预和加用CDDP后Bax，Bcl-2和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达变化情况，并讨论shRNA干扰沉默FNACD

2、2表达影响化疗敏感性的可能机制。结果：（1）实验组SIHN-005A细胞经shRNA干扰有效沉默FANCD2后蛋白表达灰度值（0.53±0.09）较之无效序列对照组（1.15±0.11）（F=78.823，P<0.05）和空白对照组（1.34±0.07）（F=104.113，P<0.05）明显下降，沉默效率达60.5%；（2）三组细胞培养并连续观察72小时，SIHN-005AFANCD2-shRNA细胞组增殖情况不及其余各组细胞，其抑制率随时间的延长而增高，分别与空白对照组（F=48.647，P<0.05）及无效序列对照组（F=22.768，P<0.05）比较

3、差异有统计学意义；（3）Hoechst染色结果示实验组细胞凋亡率（13.19±1.38）%高于无效序列对照组（2.22±2.01）%及空白对照组（1.18±0.05)%，SIHN-005AFANCD2-shRNA实验组与无效序列对照组（F=35.732,P<0.05）及空白对照组（F=42.387,P<0.05）相比凋亡率差异有统计学意义；（4）应用WesternBlot蛋白印迹法检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）表达水平，计算灰度值发现FANCD2-shRNA实验组中的表达水平（0.73±0.11）较无效序列对照组（0.96±0.14）和空白对照组（1

4、.04±0.07）明显下调，实验组与无效序列对照组（F=8.317，P<0.05）和空白对照组（F=10.759，P<0.05）比较差异2有统计学意义；（5）加入不同浓度CDDP后，CCK-8法检测结果提示，各组SIHN-005A细胞OD值随CDDP浓度的升高而降低（F=48.647，P<0.05），抑制率则随CDDP浓度的升高而增高（F=29.703,P<0.05），其中shRNA实验组的OD值较无效序列对照组（F=78.642，P<0.05）和空白对照组（F=82.521，P<0.05）明显降低，实验组抑制率则较无效序列组（F=43.381，P<0.05）

5、和空白对照组（F=67.928，P<0.05）明显增高；16μg/mlCDDP作用于各组细胞后，其OD值（F=91.026,P<0.05）与抑制率（F=77.301,P<0.05）随时间增加而增高，其中shRNA实验组OD值明显低于无效序列组（F=47.384,P<0.05）和空白对照组（F=57.275，P<0.05），实验组抑制率则明显高于无效序列组（F=56.464，P<0.05）和空白对照组（F=69.022，P<0.05），shRNA实验组SIHN-005A细胞对CDDP的IC50值11.5±0.35μg/ml，明显低于无效序列对照组18.4±1.1

6、1μg/ml（F=46.324,P<0.05）和未转染对照组19.9±1.42μg/ml（F=77.722,P<0.05）；16μg/mlCDDP作用48h后，Hoechst染色结果示shRNA实验组细胞凋亡率（85.12±2.03）%高于无效序列对照组（17.87±1.63）%（F=383.812,P<0.05）及空白对照组（11.94±2.42）%（F=454.839,P<0.05），Western-Blot蛋白印迹法结果显示shRNA实验组cyclinD1灰度值（0.55±0.09）较无效序列对照组（0.89±0.18）（F=22.482,P<0.05）

7、和空白对照组（0.97±0.24）（F=27.449,P<0.05）明显降低，且加入CDDP后实验组cyclinD1灰度值（0.55±0.09）低于未加CDDP实验组灰度值（0.73±0.11）（F=19.867,P<0.05），即加用CDDP的shRNA实验组细胞细胞周期阻滞效应较未加CDDP实验组更加明显；（6）Western-Blot蛋白印迹法检测各组细胞在未加和加用CDDP后Bax，Bcl-2，HIF-1α等相关蛋白的表3达水平。结果显示：加用CDDP后，Bax蛋白在shRNA实验组中的表达（2.78±0.17）较无效序列对照组（0.93±0.22）（

8、F=193.272,P<0.05）及空