冷诱导rna结合蛋白在缺氧复氧损伤中心肌保护作用地研究论文

《冷诱导rna结合蛋白在缺氧复氧损伤中心肌保护作用地研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论

2、文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日I万方数据摘要摘要目的:探索H9

3、c2心肌细胞在缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）条件下冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的表达及其在心肌细胞缺氧/复氧损伤中所起的具体作用。方法：（1）缺氧复氧的模型（95%N2和5%CO2）的建立，采用的是H9c2心肌细胞，在体外培养建成。（2）检测CIRP在缺氧/复氧过程中，mRNA及蛋白的表达概况，采用的是RT-PCR来检测mRNA的表达，Westernblot印迹法来检测蛋白的表达，并要着重注意两者在缺氧/复氧过程中表达最高的时间点，作为后续试验中缺氧复氧时间。（

4、3）缺氧复氧处理选择在缺氧14h及复氧2h两个时间点上进行，实验时共分为10组同时进行，分别为：①正常对照组；②H/R组；③CIRPsiRNA处理细胞组；④CIRPsiRNA处理细胞+H/R组;⑤阴性干扰处理细胞组；⑥阴性干扰处理细胞+H/R组；⑦CIRP过表达质粒处理细胞组；⑧CIRP过表达质粒处理细胞+H/R组；⑨空载质粒处理细胞组；⑩空载质粒处理细胞+H/R组.（4）用westernblot印迹法检测CIRP和凋亡蛋白caspase-3的表达情况，流式细胞仪检测各组凋亡状况。结果：（1）心肌细

5、胞缺氧处理时，RT-PCR显示CIRPmRNA表达两小时有所下降，之后有明显增加，在14小时到达最高。westernblot印迹法显示CIRP蛋白表达II万方数据摘要随着缺氧有明显增加趋势，到14小时出现高峰。流式检测表示随着缺氧时间增加凋亡增加，6小时和8小时达高峰。（2）在缺氧14小时，0~8小时的复氧时间里，CIRP在缺氧14小时复氧2h这个时间表达最高。（3）通过外源性转染过表达质粒使CIRP过表达并缺氧复氧组细胞caspase-3表达和凋亡率低于单纯缺氧复氧组，并具有统计学意义P<0.05

6、；转染CIRPsiRNA并缺氧复氧组细胞caspase-3蛋白表达量和凋亡率明显高于单纯缺氧复氧组细胞，并有统计学意义P<0.05。单纯过表达CIRP组细胞caspase-3蛋白表达低于正常组，有统计学意义P<0.05，凋亡率低于正常组，有统计学意义P<0.05；单纯干扰细胞CIRP表达组caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率高于正常组，有统计学意义P<0.05。结论：（1）H9c2细胞中CIRP正常情况下存在低水平表达。（2）H9c2心肌细胞在缺氧/复氧条件下，随着缺氧时间增加冷诱导RNA结合蛋白

7、表达逐渐增加，在缺氧14小时及复氧2小时这两个时间点上，出现表达高峰。（3）在缺氧14小时及复氧2小时这两个时间点上，高表达的CIRP能够抑制H9c2心肌细胞的凋亡；（4）在缺氧14小时及复氧2小时这两个时间点上，如果干扰CIRP表达，则可以促进H9c2心肌细胞的凋亡。（5）过表达CIRP可使H9c2心肌细胞在正常情况下减轻凋亡。（6）干扰CIRP表达可使H9c2心肌细胞在正常情况下增加凋亡。综上所述：CIRP在缺氧复氧损伤中确实有心肌细胞保护作用。关键词：冷诱导RNA结合蛋白；缺氧复氧；心肌细胞；

8、调亡III万方数据AbstractABSTRACTObjective:Reserchontheexpressionofthecold-inducedRNAbindingproteinanditsroleinmyocardialcellunderthehypoxia/reoxygenationcondition.Method:（1）UsetheH9c2myocardialcellsculturedinvitrotoestablishthehypoxia/reoxygen