pcr快速鉴定皮肤癣菌病

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1、第二军医大学硕士学位论文PCR快速鉴定皮肤癣菌病RapiddetectionofdermatophytosisbyPCR研究生姓名：学科及专业：研究方向：导师：谈燕皮肤病与性病学致病性真菌感染陈江汉教授长征医院皮肤性病科二。一四年四月独创性声明ffllllltllllltlllllllrllillfllflllllffllllllllf0Y2630208本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了中文特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论

2、文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担声明的法律责任。学位论文作者签名：拔盘签字日期：函．◆年朔9161日学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关的数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：拔垄签字日期：二t◆年·明口二日导师签名：签字日期：磁日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3英文缩写表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9第一部分PCR体系敏感性及特异性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13实验菌株及人DNA实验所用

4、引物实验所用试剂实验所用器械实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14菌株复活沙保氏培养基的配置菌株DNA的提取PCR反应不同DNA浓度梯度的稀释液通用引物特异性测定实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16通用引物的特异性结果PCR体系的反应敏感性测定讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18第二部分皮肤癣菌病传统诊断方法与PCR方法的对比⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21临床皮屑标本实验所用试剂实验所用引物实验

5、所用器械实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22皮屑的收集皮屑的分配皮屑的DNA提取内部对照的构建实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24皮屑标本的传统诊断方法与PCR诊断方法的结果对比传统方法与PCR诊断法检出率的对比皮屑标本的PCR检测结果临床标本电泳图统计学分析．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37综j鲞

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．40在读期间发表论文和参加科研工作情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54PCR快速鉴定皮肤癣茵病摘要研究目的目前实验室常用的皮肤癣菌病的诊断方法为镜检和培养，该方法对操作人员的专业性要求较高，而且培养耗时较长，在皮肤癣菌病的快速鉴定方面，虽然国内已有相关的分子研究报导，但都难以应用于临床。本研究通过对皮肤癣菌菌株以及临床诊断为皮肤癣菌病患者的皮屑标本进行研究，将PCR方法与传统诊断方法的诊断结果进行统计学对比，

7、探索临床皮肤癣菌病的快速简便特异的新型诊断方法。研究方法第一部分使用65株皮肤癣菌临床株以及50株非皮肤癣菌临床株和2例人DNA用于PCR体系的优化及CHSl(Chitinsynthase1)引物的评估。采用1步法处理皮肤癣菌及非皮肤癣菌菌株获得菌株DNA，然后用皮肤癣菌特异性引物CHSl(panDerml：5’GAGAGATGTCGTGCATCGTCTC3’，panDerm2：5’CTCGAGTCAAAAGCACGCAGAG3’)对获得的DNA产物进行PCR扩增。皮肤癣菌通用引物的敏感性测定：将获得的菌株DNA以及人DNA进行PCR扩增后

8、跑电泳，观察是否出现特定大小的阳性条带。PCR反应体系的敏感性测定：用超微量分光光度计测量皮肤癣菌菌液的DNA浓度，再将皮肤癣菌菌液的DNA进行10倍连续稀释，获得不同浓度的皮肤