常见皮肤癣菌的基因分型论文

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1、常见皮肤癣菌的基因分型论文【摘要】目的建立快速、简便鉴别4种常见皮肤癣菌(红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌和石膏样小孢子菌)的分子生物学基因分型方法。方法将我室分离培养得到的18株红色毛癣菌、12株须癣毛癣菌、8株絮状表皮癣菌和6株石膏样小孢子菌接种于PDA培养基上培养2周后,分别收集菌丝体并用氯化苄法提取DNA,运用随机扩增多态性DNA分析的方法，以单个引物(GACA)4进行随机扩增。检测聚合酶链反应产物，并根据电泳后指纹图谱的差异进行种属间鉴别。结果同种不同株的皮肤癣菌电泳后指纹图谱相同,不同种皮肤癣菌电泳后指纹图谱有显著差异。结

2、论运用随机扩增多态性DNA分析的方法，可对红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌和石膏样小孢子菌的基因型进行快速鉴别,能够协助临床早期诊断。【关键词】表皮癣菌属基因型随机扩增多态DNA技术实验室技术和方法［ABSTRACT］ObjectiveToestablisharapid,reliablemethodtodistinguishmonspeciesofdermatophytes.MethodsRandomamplificationofpolymorphicDNA(RAPD)andasimplerepetitiveoligonucleoti

3、de(GACA)4plifytheDNAofTrichophytonrubrum(n=18),Trichophytonmentagrophyte(n=12),Epidermophytonfloccosum(n=8)andMicrosporumgypseum(n=6)ResultsTheDNAofallthestrainsofdermatophytesplifiedsuccessfully,producingspeciesspecificprofiles.ConclusionTherandomamplificationofpolymorph

4、icDNAforidentificationofmonspeciesofdermatophytesisastable,promptandsensitivemethod.ConclusionEpidermophyton；genotype；randomamplifiedpolymorphicDNAtechnique;laboratorytechnicsandprocedures.［KEYgCl2(25mmol/L)。反应条件:起始变性94℃5min；变性94℃1min，退火47℃1min，延伸72℃1min,37个循环；延伸72℃6min。产

5、物于20g/L琼脂糖凝胶电泳(4.5V/cm)1.5h,紫外线灯下照相观察。2结果从电泳凝胶上可观察到，4种菌株均得到有效扩增,不同种皮肤癣菌产生具有不同特征的电泳带型。其中红色毛癣菌的主要扩增条带有4条，大小分别约590、530、480、350bp，特征主条带为590、350bp；须癣毛癣菌主要扩增条带有7条,大小约690、590、540、500、450、390、350bp,特征主条带为690、590、500bp共3条；絮状表皮癣菌主要扩增条带有4条,大小约590、390、350、210bp,特征主条带为350、210bp；石膏样小孢子

6、菌主要扩增条带有5条，大小约590、490、350、310、250bp,特征主条带为490、310、250bp共3条。相同菌种的DNA主要带型一致：18株红色毛癣菌带型一致，未见种内差异；12株须癣毛癣菌带型一致，未见种内差异；8株絮状表皮癣菌带型一致，未见种内差异；6株石膏样小孢子菌带型一致，未见种内差异（图1）。3讨论RAPD分析是一种利用随机合成的单个寡核苷酸引物，通过PCR反应扩增靶细胞DNA,扩增产物经凝胶电泳,分析DNA片段大小和数量多态性,从而比较靶基因差异的技术。该方法操作简便、迅速,便于大规模使用,已陆续用于酵母菌和丝状

7、真菌的鉴定、分类和流行病学研究。MEYER等［3］用寡核苷酸重复序刊(GACA)4、(GTG)及M13中心序列(5′GAGGGTGGCGGTTCT3′)等3种引物作为RAPD的随机单引物,对42株新生隐球菌进行研究,结果表明RAPD具有高度重复性,且在种、变种和单个菌株水平上存在差异。LOUDON等［4］报道，RAPD对曲霉菌鉴定和分型有良好的应用价值。本文应用RAPD方法和引物(GACA)4对4种常见的皮肤癣菌（包括红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌和石膏样小孢子菌共44株）进行了PCR扩增，结果显示，不同种的真菌DNA经扩增后产

8、生不同的DNA带型；同一菌种的同一样品在不同次实验中，相同引物产生的DNA带型一致，并且带型清晰，重复性良好。另外,我们分离的红色毛癣菌表型为羊毛型、绒毛型的有10株，粉末、沟纹型的6株，颗粒